NYT 1156.2-2006农药室内生物测定试验准则 杀菌剂 第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验 平皿法.pdf

ICS 65.100B 17NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1156.2—2006杀菌剂农药室内生物测定试验准则第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平皿法Pesticides guidelines for laboratory bioactivity testsPart 2: Petri plate test for determining fungicide inhibition of mycelial growth2006-10-01实施2006-07-10发布中华人民共和国农业部发布 NY/T1156.2—2006前言《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》为系列标准。本部分是《农药室内生物测定试验准则杀菌剂》的第2部分。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部农药检定所。本标准主要起草人：朱春雨、吴新平、徐文平、张弘、邱涧平、李钟华。本标准由农业部农药检定所负责解释。- NY/T1156.22006农药室内生物测定试验准则杀菌剂第2部分：抑制病原真菌菌丝生长试验平血法1范围本部分规定了平血法测定杀菌剂抑制病原真菌菌丝生长试验的基本要求和方法。本部分适用于杀菌剂对病原真菌菌丝在平板表面生长抑制作用测定的农药登记室内试验，其他试验参照本部分执行。2试验条件2.1试验靶标试验靶标应选择在人工固体培养基上菌丝能沿水平方向、有一定生长速率且周缘生长较整齐的真菌，如番茄灰霉病菌（Botrytiscinerea）、水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani）、小麦赤霉病菌（Fusariumgraminearum）、辣椒疫病菌（Phytophthora capsici）、辣椒炭疽病菌（Colletotrichum capsici）和番茄早疫病菌（Alternaria solani）等。记录菌种来源。2.2仪器设备2.2.1电子天平(感量0.1mg);2.2.2生物培养箱；2.2.3培养皿；2.2.4移液管或移液器；2.2.5接种器；2.2.6打孔器；2.2.7卡尺等。3试验设计3.1试材准备试验用病原真菌在适宜的培养基上培养备用。锥形瓶、玻璃棒、移液管、培养皿、打孔器、接种器等灭菌后备用。3.2药剂3.2.1试验药剂试验药剂采用原药（母药），并注明通用名、商品名或代号、含量和生产厂家。3.2.2对照药剂对照药剂采用已登记注册且生产上常用的原药。对照药剂的化学结构类型或作用方式应与试验药剂相同或相近。3.3试验步骤3.3.1药剂配制水溶性药剂直接用水溶解稀释。其他药剂选用合适的溶剂（如甲醇、丙酮、二甲基甲酰胺或二甲基亚砜等)溶解，用0.1%的吐温80水溶液稀释。根据药剂活性，设置5个～7个系列质量浓度，有机溶剂I NY/T 1156.2-2006最终含量不超过2%。3.3.2药剂处理在无菌操作条件下，根据试验处理将预先融化的灭菌培养基定量加入无菌锥形瓶中，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加人上述锥形瓶中，充分摇匀。然后等量倒人3个以上直径为9cm的培养血中，制成相应浓度的含药平板。试验设不含药剂的处理作空白对照，每处理不少于3个重复。3.3.3接种将培养好的病原菌，在无菌条件下用直径5mm的灭菌打孔器，自菌落边缘切取菌饼，用接种器将菌饼接种于含药平板中央，菌丝面朝上，盖上血盖，置适宜温度的培养箱中培养。4调查根据空白对照培养皿中菌的生长情况调查病原菌菌丝生长情况。用卡尺测量菌落直径，单位为毫米（mm）。每个菌落用十字交叉法垂直测量直径各一次，取其平均值。5数据统计与分析5.1计算方法根据调查结果，按公式（1）、（2)计算各处理浓度对供试靶标菌的菌丝生长抑制率，单位为百分率（%），计算结果保留小数点后两位。D=D1-D2(1)式中：D.菌落增长直径；D1菌落直径；D2菌饼直径。I= Do_ D × 100(2)Do式中：I—菌丝生长抑制率；Do——空白对照菌落增长直径;Dt——药剂处理菌落增长直径。5.2统计分析根据各药剂浓度对数值及对应的菌丝生长抑制率几率值作回归分析,计算各药剂的ECso、ECgo等值及其95%置信限。进行药剂联合毒力测定时，根据Wadley法或孙云沛法计算混剂的增效系数（SR)或共毒系数（CTC），评价混剂的联合作用类型。Wadley法：根据增效系数(SR)来评价药剂混用的增效作用，即SR0.5为拮抗作用，0.5≤SR≤1.5为相加作用,SR1.5为增效作用。增效系数(SR)按式(3)、式(4)计算：PA + PBXI=PA/A+PB/BxX100:(3)式中：X1——混剂的ECso理论值,单位为毫克每升(mg/L);PA——混剂中A的百分含量，单位为百分率（%）;PB—一混剂中B的百分含量，单位为百分率（%）；2 NY/T 1156.2—2006A一混剂中A的ECso值，单位为毫