SN_T 4056-2014蜂蜜中烟曲霉素残留量的测定 液相色谱-串联质谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4056—2014蜂蜜中烟曲霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法Determination of fumagillin residue in honey-LC-MS-MS-method2015-05-01实施2014-11-19 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局亲用 SN/T 4056—2014前．言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出人境检验检疫局。本标准主要起草人：刘晓茂、葛娜、李学民、王飞、张进杰、曹彦忠、宋强。1 SN/T 4056—2014蜂蜜中烟曲霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法1范围本标准规定了蜂蜜中烟曲霉素残留量的液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于蜂蜜中烟曲霉素残留量的测定。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3方法提要蜂密试样用水稀释，经HI.B固相萃取柱净化，液相色谱-串联质谱(ESI十)检测,外标法定量。试剂和材料41除另有说明外，所用试剂均为优级纯，水为GB/T6682规定的一级水。4.1甲醇：色谱纯。4.2乙腈：色谱纯。4.3甲酸：优级纯。4.4　乙酸乙酯：色谱纯。4.5甲醇-水（3+7,体积比)溶液：取30ml甲醇（4.1)用水定容至100 mlL。乙腈-水（1+十1，体积比）溶液：取50mI乙腈（4.2)用水定容至100 mL。4.64.7标准物质：烟曲霉素（CAS号：23110-15-8）；纯度大于或等于98%。4.8烟曲霉素标准贮备溶液：1.0mg/mI。称取适量的烟曲霉素标准物质（4.7），用甲醇溶解并配制成1.0 mg/mL的标准贮备液。避光保存于一18℃冰柜中。4.9烟曲霉素标准工作溶液：1.0μg/mI.。吸取适量烟曲霉素标准贮备溶液（4.8），用乙腈-水（4.6)稀释成1.0μg/ml.的标准工作溶液，避光保存于一18℃冰柜中。4.10HLB固相萃取柱：500mg，6mL,或相当者，使用前依次用5mL甲醇和10mL水预处理，保持柱体湿润。4.11微孔滤膜:0.2 μm，尼龙。5仪器5.1液相色谱-串联四极杆质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI）。1 SN/T 4056--20145.2分析天平：感量分别为0.01mg和0.01g。5.3旋涡混匀器。5.4固相萃取装置。5.5真空泵：真空度应达到80kPa。5.6氮气吹干仪。5.7三角瓶:200 mL。5.8 试管:10 mL。6试样的制备与保存6.1试样的制备对于无结晶的实验室样品,将其搅拌均匀。对有结晶的样品,在密闭情况下，置于不超过50℃的水浴中振荡，待样品全部融化后搅拌均匀，冷却至室温。分出0.5kg作为试样。6.2试样保存试样置于常温下，避光保存。试样在制备和保存过程中应避免受到污染或待测物含量发生变化。7测定步骤7.1提取净化称取蜂蜜样品5g（精确到0.01g），置于200mL三角瓶（5.7）中，加人15mL水，涡旋混合 5min后，全部倒人下接固相萃取柱（4.10)的贮液器中，在固相萃取装置（5.4）上使样液以小于2mL/min的流速依次通过固相萃取柱，待样液全部通过后，用25mI甲醇-水（4.5)洗涤固相萃取柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下,减压抽干10 min。用7mL乙酸乙酯（4.4)洗脱至 10 mL试管（5.8)中，于40℃水浴中氮气吹至近干，用1mI.乙脂十水（4.6)溶解残余物，供液相色谱-串联质谱仪测定。7.2测定7.2.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a）色谱柱:C18,1.7 μm,50 mmX2.1 mm(内径)或相当者;b）柱温：35℃；c)进样量：10 μL;d)流动相：A：0.1%甲酸(4.3)水溶液;B：乙睛。梯度洗脱条件见表1。表1液相色谱梯度洗脱条件时间/min流速/(μL/min)流动相 A/%流动相B/0.730010 9021 300851543008515 SN/T 4056—20147.2.2质谱参考条件质谱参考条件如下：a）离子源：电喷雾离子源;b）扫描方式：正离子扫描；c）检测方式:多反应监测（MRM);d）雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求，参考条件参见附录A；e）喷雾电压、去集簇电压、碰撞能量等参数应优化至最优灵敏度，参考条件参见附录A。7.2.3液相色谱-串联质谱测定定性确证被测组分选择1个母离子，2个以上子离子