SN_T 1554-2016鸡法氏囊病检疫技术规范.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1554--2016代替SN/T1554—2005鸡法氏囊病检疫技术规范Quarantine protocol for chicken infectious bursal disease2017-07-01实施2016-12-12 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局、刮涂层查真伪、 SN/T 1554—2016前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准代替SN/T1554--2005《鸡传染性法氏囊病酶联免疫吸附试验操作规程》，与SN/T1554—2005相比，主要技术变化如下：增加了鸡法氏囊病毒分离与鉴定；一增加了直接免疫荧光试验；-增加了反转录-聚合酶链式反应;一增加了实时荧光反转录-聚合酶链式反应；一增加了琼脂凝胶免疫扩散试验。本标准参照了OIE《陆生动物诊断试验和疫苗标准手册》（2008)第2.3.12章《传染性法氏囊病-甘波罗病》。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国深圳出人境检验检疫局、深圳市检验检疫科学研究院。本标准主要起草人：孙洁、廖立珊、陶虹、刘建利、杨春华、杨俊兴、唐金明、林庆燕、曾少灵、张彩虹、秦智锋、吕建强、花群义、曹琛福、宗卉、陈书琨、张强、阮周曦。本标准所代替的标准的历次版本发布情况为：SN/T 1554---2005.l SN/T 1554—2016鸡法氏囊病检疫技术规范1范围本标准规定了鸡法氏囊病的临床症状与病理变化、病毒分离与鉴定、反转录-聚合酶链式反应、实时荧光反转录-聚合酶链式反应、直接免疫荧光试验、琼脂凝胶免疫扩散试验、酶联免疫吸附试验。本标准适用于进出境鸡法氏囊病I型的诊断和检疫。2　规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682　分析实验室用水规格和试验方法GB/T18088出人境动物检疫采样GB/T 27634--2011传染性囊病病毒核酸检测方法3诊断技术3.1临床诊断3.1.1临床症状当出现以下部分或全部症状时，可作为初步诊断的依据之一：啄肛、腹泻，排出白色黏稠或水样稀便，食欲逐渐消失，颈和全身震颤，病鸡步态不稳，羽毛蓬松，精神萎顿，卧地不动，体温升高，泄殖腔周围的羽毛被粪便污染，脱水严重，趾爪干燥，眼窝凹陷，衰竭死亡。其他参见附录A。3.1.2病理变化当出现以下肉眼可见的病变时，可作为初步诊断的依据之一：法氏囊肿大出血，严重出血呈紫黑色如紫葡萄状，法氏囊水肿，囊壁增厚，外形变圆，呈土黄色，包裹有胶冻样透明渗出物；肌肉出血，大腿内外侧和胸部肌肉常见条纹状或斑块状出血;腺胃和肌胃交界处出现出血点或出血斑；肾脏肿大，尿酸盐沉积，输尿管扩张。3.2病毒分离与鉴定3.2.1样品的采集和处理按照GB/T18088的要求进行样品的采集，所有用水需符合GB/T6682二级水、三级水要求。出现临床症状的病死鸡，剖检后取法氏囊和脾脏，切碎，1：5（质量体积比）比例加入含抗生素的0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS,pH7.2）（配方见附录B,研磨后反复冻融3次，4000r/min离心10min，取上清液作为被检样本。1 SN/T 1554--20163.2.2雏鸡接种试验接种雏鸡取上清液，点眼接种5只14 d～21 d无 IBDV母源抗体雏鸡或无特定病原体（SPF）鸡，每只鸡0.05 mL。同时用标准 IBDV毒株(CJ801-BKF)作为阳性对照,PBS溶液作为阴性对照。接种 3 d～4 d后剖杀，检查法氏囊和脾脏病变。结果判定阳性对照雏鸡剖检结果：雏鸡死亡，法氏囊水肿、色黄，严重可见出血。脾脏肿大，表面有灰色点状病变。阴性对照剖检正常。在阳性对照和阴性对照都成立的情况下，对样品接种后的雏鸡进行剖检。阳性：剖检可见阳性对照特征性病变。阴性：剖检显示正常。对于结果判定为初步阳性的样品，进行下一步试验进行确证。3.2.3鸡胚接种试验接种鸡胚取上清液经0.22μm滤膜过滤除菌后，经卵黄囊接种5枚6d～8d无IBDV母源抗体鸡胚或SPF鸡胚,同时经绒毛尿囊膜接种 5枚 9d～11d无 IBDV母源抗体鸡胚或 SPF鸡胚，每只 0.2mL，接种后用石蜡封住接种孔。同时用标准IBDV毒株（CJ801-BKF）作为阳性对照，PBS溶液作为阴性对照进行鸡胚病毒接种试验。37℃士1℃孵育，每天照蛋检查，弃去 48 h 内死亡的鸡胚。结果判定阳性对照鸡胚剖检结果：标准的 IBDV毒株（CJ801-BKF)接种鸡胚3d～5d后剖检鸡胚矮小，充血，羽毛囊、趾关节和大脑有出血斑。肝脏