SN_T 3729.10-2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第10部分：香蕉成分检测　 实时荧光PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3729.10-2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第10部分：香蕉成分检测实时荧光 PCR 法Identification of fruit species in export food and drink-Part 1O: Detection of banana ingredient Real-time PCR method2013-11-06 发布2014-06-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局套真 SN/T 3729.10-—2013前創言SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为以下10个部分：第1部分：草莓成分检测PCR法；第2部分：杏成分检测实时荧光PCR法；一第3部分：梨成分检测实时荧光PCR法；实时荧光 PCR法；一第4部分：芒果成分检测-第5部分:木瓜成分检测实时荧光PCR法；-第6部分·苹果成分检测实时荧光PCR法；PCR法;一第7部分：葡萄成分检测一第8部分：山楂成分检测实时荧光PCR法；-第9部分：桃成分检测　实时荧光 PCR法；第10部分：香蕉成分检测　实时荧光PCR法。本部分为SN/T3729的第10部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张舒亚、叶军、于翠、李富威、刘月明、陈颖、吴亚君、韩建勋。1 SN/T 3729.10—2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第10部分：香蕉成分检测实时荧光PCR 法1 范围SN/T3729的本部分规定了出口食品和饮料（油酒精等精加J.食品除外）中香蕉成分的实时荧光PCR 检测方法。本部分适用于果汁、果酱及其他以水果为原辅料的食品中香蕉成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限(LOD)为1%（质量分数）2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1香蕉 Musa paradisaca芭蕉科芭蕉属植物。3.2清汁clarified juice经过澄清工艺加工，没有浑浊和沉淀的果汁。3.3浊汁 cloudy juice未经过澄清工艺加工，浑浊但未分层和沉淀的果汁。4缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid) SN/T 3729.10--2013dNTP：脱氧核苷酸三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate)。CTAB:十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide）。Tris:三(羟甲基)氨基甲烷Ltris(hydroxymethyl)aminomethane]。EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)。Taq:水生栖热菌（Thermus aquaticu）。OD:光密度值(optical density）。5方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用香蕉的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，进行食品及饮料中香蕉成分的检测鉴定，其中以香蕉果肉DNA为阳性对照，以非香蕉来源的DNA为阴性对照,无菌水作为空白对照。6　试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无 DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物和探针：见表1。表 1 引物探针序列引物/探针引物/探针序列（5→3）目的基因内参照5端引物CCTGAGAAACGGCTACCAT内参照3端引物CGTGTCAGGATTGGGTAAT真核生物18SrRNA基因内参照探针FAM-TGCGCGCCTGCTGCCTTCCT-TAMRA香蕉5端引物TCGTCCCCTATTGGGATGC香蕉3端引物GTTTCGGCCTGCGCTTTAA香蕉线绿体rbcl.基因香蕉探针FAM-TGCACCGAAGCACT-MGB6.2 CTAB 提取缓冲液:20 g/L CTAB,1.4 mol/L NaCl,0.1 mol/I Tris-HCl,0.02 mol/L Na2EDTA,pH CTAB沉淀液:5 g/L CTAB,40 mmol/L NaCl。6.4三氯甲烷（氯仿）。6.5 异丙醇。6.6 70%乙醇。6.7蛋白醇K溶液（20mg/mlL