LMP-1与LMP-3真核双表达质粒的构建及体外表达的开题报告.docxVIP

LMP-1与LMP-3真核双表达质粒的构建及体外表达的开题报告 一、研究背景与意义 EB病毒是一种广泛存在于全球人群中的病毒，感染EB病毒的人群高达90%以上，但多数人只是携带着EB病毒，很少发生明显疾病。不过，在免疫力低下的情况下，EB病毒便可能引起较为严重的疾病。例如，EB病毒是淋巴系统肿瘤和鼻咽癌主要的致病因素之一。LMP-1和LMP-3是EB病毒潜伏感染和转化过程中的关键质膜蛋白，在EB病毒性肿瘤等疾病的发生发展中起着重要的作用。因此，对LMP-1与LMP-3这两种蛋白的研究有助于我们更加深入地了解EB病毒的生物学特性和病理学机制，为疾病的防治提供科学依据。 二、研究内容及方法 本项目旨在构建一种真核双表达质粒，用于高效表达LMP-1与LMP-3蛋白，并进行体外表达实验。为此，我们将采用PCR技术扩增LMP-1和LMP-3基因的全长，并分别插入真核表达质粒pCMV、pEGFP-C1和pIRES2-GFP等载体中。之后，将LMP-1和LMP-3基因的真核表达质粒重组拼接在一起，构建成真核双表达质粒pCMV-LMP-1-IRES2-LMP-3。用此真核双表达质粒转染至HEK293T细胞中，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫荧光染色等方法检测两种蛋白的高效表达。 三、研究预期结果 通过本研究，我们将建立一种较为高效的LMP-1与LMP-3真核双表达质粒，能够在体外实现两种蛋白的同时高效表达。同时，我们预计该真核双表达质粒的构建和体外表达实验，将有助于深入了解LMP-1与LMP-3蛋白的结构与功能，对进一步研究EB病毒的生物学特性和病理学机制等方面有所启示。 四、研究难点及解决方案 LMP-1和LMP-3是EB病毒潜伏感染和转化过程中的关键质膜蛋白，表达量很低，难以用常规方法获得大量纯化的蛋白，因此需要在表达系统的选择上做出特别的考虑。为解决这一问题，我们将采用多种表达载体进行蛋白大量表达，并在传统的蛋白纯化方法基础上，配合亲和层析和分子筛分离等新技术手段，实现高效纯化LMP-1和LMP-3蛋白。