饲用果胶酶活力的测定.pdf

ICS 65.120 CCS B 46 中华人民共和国国家标准 GB/T XXXXX—XXXX ` 饲用果胶酶活力的测定 Determination offeedpectinaseactivity (点击此处添加与国际标准一致性程度的标识) （送审稿） （本草案完成时间：） 在提交反馈意见时，请将您知道的相关专利连同支持性文件一并附上。 XXXX-XX-XX发布 XXXX-XX-XX实施 GB/T XXXXX—XXXX 饲用果胶酶活力的测定 1 范围 本文件描述了饲用果胶酶活力的分光光度测定方法。 本文件适用于饲料添加剂果胶酶和含有果胶酶的混合型饲料添加剂酶制剂中果胶酶活力的测定。 本方法定量限为10 U/g （或U/mL）。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本 （包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 果胶酶活力单位 pectinase activity unit 在37℃、pH 3.5的条件下，每小时从浓度为2.25mg/mL的果胶溶液中分解释放1mg还原糖所需要的 酶量。 注：酶活力单位为U。 4 原理 果胶酶能将聚半乳糖醛酸降解成寡糖和单糖。具有还原性末端的寡糖和还原基团的单糖在沸水浴条 件下可以与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应。在一定范围内，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量 成正比，而还原糖的生成量又与反应液中果胶酶活力成正比。因此，用分光光度计在波长540nm下测定 试样液的吸光度值，与标准系列比较定量，计算果胶酶活力。 5 试剂或材料 除非另有说明，仅使用分析纯试剂。 5.1 水：GB/T 6682，三级。 5.2 氢氧化钠溶液 （200g/L）：称取氢氧化钠20.0g，加水溶解，冷却至室温后定容至100mL。 1 GB/T XXXXX—XXXX 5.3 柠檬酸溶液 （0.1mol/L）：称取一水柠檬酸21.01g，加水溶解并定容至 1000mL。 5.4 柠檬酸三钠溶液 （0.1mol/L）：称取二水合柠檬酸三钠29.41g，加水溶解并定容至1000mL。 5.5 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 （0.1mol/L，pH 3.5）：取柠檬酸溶液 （5.3）700mL，柠檬酸三钠溶液 （5.4）300mL，混匀，缓冲液pH 如偏离3.5，用柠檬酸溶液 （5.3）或柠檬酸三钠溶液 （5.4）调节pH 至3.5。 5.6 果胶溶液 （3.0mg/mL）：称取果胶 （≥74%聚半乳糖醛酸，CAS：9000-69-5）0.3g，精确至0.0001 g，加入80mL 0.1mol/L 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 （5.5），搅拌加热，直至果胶完全溶解，在搅拌加热 的过程中可以补加适量的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 （5.5），总体积不超过100mL。停止加热 （在保证果 胶完全溶解的前提下，加热时间保持在 1小时内），继续搅拌至溶液冷却，用柠檬酸溶液 （5.3）或柠 檬酸三钠溶液 （5.4）调节pH 至3.5，用柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液 （5.5）定容至100mL。临用现配。 5.7 3，5-二硝基水杨酸 （DNS）试剂：称取DNS3.15g，加水500