血清胆固醇含量的测定实验报告.docVIP

实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告 实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。 实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H2O2与4-氨基安替比林和DHBS反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。 胆固醇酯+ H2O胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O2△4胆甾烯酮+ H2O2 H2O2+4-氨基安替比林+DHBS醌亚胺+ H2O 实验步骤： 1、取2支试管分别加入0.2mL的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H”和“SH”试管。往每支试管加入0.2mL的沉淀剂，在室温下静置15min，用2000rad/min的离心机分离10min。 2、准备5支试管分别标注为“T”（总胆固醇）、“H”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST”（标准总胆固醇）、“SH”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL） 试管 T ST H SH B 上层清液 — — 0.2 0.2 — 血清 0.02 — — — — 标准胆固醇 — 0.1 — — — 蒸馏水 0.18 0．1 — — 0.2 酶试剂 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 3、准备好以上试管后，充分混合并在3