整理)慢病毒稳转细胞株步骤.docx

1/5 (稳转) 稳转慢病毒 一、所需试剂 1、慢病毒载体(详细信息见附录及《质粒的扩增提取》 ) (大肠杆菌-80C 保存 2—3 年，质 粒一 20C 保存 2-3 年，病毒液-80C 保存 1 年) ⑴载体质粒：两端的 LTR、剪切位点、包装信号 W 以及抗性或荧光基因、 gag 基因 5 端 350bp 的序列 及位于 env 序列中的 RRE ,含宿主 RNA 聚合酶识别部分 (2) 包装质粒(psPAX2) 包含了 pol、gag 包装成分 ⑶包膜质粒(pMD2。G) :用其他病毒的包膜蛋白代替了 env 基因. 三种质粒共同转染产生不具有自我复制能力的病