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6.基因工程类大题突破
1.(2022 山东枣庄模拟)三氯生是一种抑菌物质,具有优异的贮存稳定性,可以替代抗生素
用于基因工程中筛选含目的基因的受体细胞。已知fabV (从霍乱弧菌中发现的烯酯酰
ACP 还原酶)基因可以使大肠杆菌抵抗三氯生。
图1
图2
(1)通过 PCR 方法获取fabV 基因时,Taq 酶只能从 延伸 DNA 链,而不
能从头开始合成 DNA, 因此需要先根据 设计
两种特异性引物序列。反应体系的初始温度设置在 90~95 ℃的目的
是 。
(2)在步骤④中,需将大肠杆菌菌液利用 法接种到加有
的细菌培养基上,待菌落长成后,直接挑取菌落加入 PCR 反应系统中进行基因鉴定。
PCR 过程中不需要先提取细菌 DNA 的原因是: 。
(3)某科研团队将可以受温度调控的基因插入上述选出的重组质粒中,构建了温度调控表
达质粒(如图 2) 。其中 C 基因在低温下会抑制 P ,R 基因在高温下会抑制 P 。如果将
1 2
lacZ 基因和 GFP 基因插入图2 质粒中,使其最后表现为低温下只表达 GFP 蛋白,而高温
下只表达 lacZ 蛋白。则 lacZ 基因应插在 之间,GFP 基因插在
之间。
2.(2022 海南琼海三模)2020 年中国政府提出“努力争取 2060 年前实现碳中和”的目标。
发展利用生物能源是实现碳中和的有效途径。紫苏种子含大量油脂,出油率达
35%~64%,三酰甘油(TAG)是紫苏种子的主要储藏脂类,DGAT1 是 TAG 合成的关键酶。
科研人员将紫苏 DGAT1 基因导入微藻中,培养高产生物柴油的工程藻,如图所示。
注:BamH Ⅰ和HindⅢ是两种限制酶。
回答下列问题。
(1)从紫苏组织细胞中提取总 RNA 时,需要加入 RNA 酶抑制剂, 目的
是 。将RNA 逆转录合成的 cDNA 作为模板,PCR 扩增 DGAT1 基因,
反应体系中需加入 酶,其作用
是 。为
使 DGAT1 基因两端分别添加 BamH Ⅰ和HindⅢ识别序列,可将相应序列分别添加在两
种引物的 (填“5”或“3”)端。
(2)构建 DGAT1 基因表达载体的目的是 ,
使 DGAT1 基因能够表达并发挥作用。若只考虑 DNA 片段的两两连接,构建表达载体时
可得到 种大小不同的连接产物。利用 法将不同
大小的 DNA 片段和连接产物分离,再将基因表达载体分离纯化,导入微藻细胞。
(3)若鉴定微藻基因组中整合有 DGAT1 基因, (填“能”或“不能”)说明高产油工程
藻已生产成功。理由是:
(答出 1 点即可) 。“碳中和”的含义是通过计算CO2 的排放总量,然后通过植树等方式把
这些排放量吸收掉。与使用石油等化石燃料相比,生产使用生物柴油有利于实现碳中和,
原因是: 。
3.(2022 河北石家庄三模)研究发现人溶菌酶(hLZ)是天然抗生素替代品。科学家培育出
转入溶菌酶基因的山羊,可大规模生产人溶菌酶(从乳汁中提
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