分子生物学实验报告_2.docVIP

华中科技大学 生命科学与技术学院 生物医学工程 分子生物学实验报告 5 - 2011/11/18 生命学院09级分子生物学实验报告 目录： 实验一 质粒 DNA 的小量制备（P2-P4） 实验二 DNA 的含量、纯度与分子量的电泳法测定（P4-P7） 实验三 感受态细胞的制备及转化（P7-P9） 实验一 质粒DNA的小量制备 一、实验目的 1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 3. 制取质粒以备大肠杆菌的培养和电泳。 二、实验材料及试剂 材料：大肠杆菌E.coli，含pBR322质粒。 试剂： LB培养基：10g/L胰蛋白胨，5g/L酵母提取物，10g/L NaCl，用NaOH调pH至7.3左右。如固体培养基则添加15g/L琼脂。 溶液Ⅰ（pH8.0G.E.T缓冲液）：50 mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris-HCl，10mmol/L EDTA。灭菌后存放。 溶液Ⅱ（0.2mol/LNaOH(内含1％SDS)）：预先配制1％SDS母液，临用前一天晚上加入0.2mol/LNaOH，4℃保存 溶液Ⅲ（pH4.8乙酸钾溶液）：5mol/L乙酸钾60mL、冰乙酸11.5mL、双蒸馏水28.5mL。 酚/氯仿液(V/v＝1/1)：酚为重蒸酚，配制时，先将氯仿中加入异戊醇，使其体积比为24:1，然后等量的加入重蒸酚，混匀，并用0