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培养条件决定由戊糖乳杆菌LPS26生产的两种细胞外多糖的平衡 Jorge-Ignacio Sa′nchez,1 Beatriz Mart?′nez,1 Rafael Guille′n,2 Rufino Jime′nez-D?′az,2 and Ana Rodr?′guez1* 第三学习小组全体成员： 刘一辰 田凯 边鑫 陈果 靳慧杰 王向宇 高陆 李宏岳 王乐乐 ;摘要;前言;前言;材料和方法;1 菌株和培养基条件;2 对细胞表面进行化学处理;3 EPS的分离纯化 ;4 EPS的定量;5 单糖的分析 ;6 发酵条件;7 动力学参数;8 以牛奶进行培养;9 统计学分析;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法;材料和方法; 图1.高压液相色谱分析L. pentosus LPS26产生的EPS 分析显示存在分别对应两个峰的两种多聚物，一种大分子量（high-Mw）多聚物（EPS A），分子量1.9×106 Da，另一种小分子量多聚物（EPS B)，分子量3.3×104Da。 ;气相色谱-质谱分析显示两种EPS的单糖组成是不同的。EPS A由葡萄糖和鼠李糖组成，其物质的量之比近似为3：1，然而EPS B由葡萄糖和甘露糖组成，比例相似。;甘露醇和果糖分别提供了最高（黄）和最低（绿）的活菌数，但是甘露醇和葡萄糖之间没有检测到明显的差别。 果糖和甘露醇导致较低的EPS合成，然而葡萄糖和乳糖则是更适合EPS产生的糖源。 EPS A似乎比EPS B更依赖于特定碳源 用甘露醇，葡萄糖和乳糖发酵得到的EPS A占有更高的比率。但是，用果糖发酵则得到相反的比率。 用不同碳源发酵，两种EPS的单糖组成的差异都很小。;随着糖源浓度增加，活菌数增多。 EPS随着初始葡萄糖浓度的增加而增加。 葡萄糖浓度在5克每升时，EPS产量最大， 20~40g/L时，EPS产量持在很窄的范围内，且EPS A和EPS B的比率不受葡萄糖浓度的影响。;温度影响两种EPS的产量，从EPS A的产量可以看出温度与EPS的产量呈负相关性。20℃的总多聚物量是25℃条件下的1.2倍、是30℃条件下的1.6倍。20℃条件下的EPS产量也比25℃和30℃条件下的多。 相反的，通过20℃和25℃的显著不同可以得出低温降低活菌数。;对pH进行调节可提高两种EPS的产量，而且EPS B的效果尤为明显。 pH5.0时可检测出更多的活菌数。 EPS产量在pH6.0 时明显高于 pH5.0 和不调节 pH的两组。; 根据不同温度和不同pH条件下的实验，确定了一个适合L. pentosus LPS26的生长条件用于生产EPS。L. pentosus LPS26培养于SDM中，葡萄糖含量30g/L，pH6.0，20℃培养。我们可以确定总EPS的产量为511mg/L。;在D＝0.02 h-1时得到最大的EPS A产量，而更高的稀释度会导致产量显著下降。 从0.02到0.07 h-1的稀释度范围内，只得到很少的EPS B（50mg每升），因此，EPS B的产量似乎不受生长率的影响。 极稀的稀释度下（0.02到0.04 h-1），葡萄糖消耗量和乳酸盐的生成量相似。在更高的D值（0.07到0.11 h-1）下，残留的葡萄糖增多，而乳酸盐浓度降低。 在D＝0.02 h-1时，EPS产量最大（18.9mgEPS/g葡萄糖），单位体积产率Pv最大（7.08mgL－1h－1）。; 在牛奶和补加葡萄糖和酵母提取物的牛奶中，对LPS26和酸化的L.lactis进行联合培养。在牛奶培养基中，EPS产量很低，但主要产生的是EPS B。 对牛奶培养基进行补充后，不仅微生物量有了明显的增加（LPS26 2.5×108CFU ml-1和IPLA947 1.8×109CFU ml-1）而且EPS B有了极大的增长，所以EPS总产量也有了明显的增长（162.9mg/L）;我们的结果显示培养条件对L.pentosus的生长和产生EPS有明显的影响，并能够证明用分批发酵时EPS产量高达511mg/L。 碳源对L.pentosus LPS26的生长和产生EPS的量以及两种EPS的比率有明显的影响。葡萄糖提供EPS的高产量而且明显更支持EPS A 的合成。相反，果糖更利于EPS B 的合成。L.pentosus LPS26的生长和EPS的产生无直接联系，因为最大活菌数量与EPS 的最大产量并不相符。 最低糖浓度时葡萄糖的单位产EPS量是最高的，糖原的过量并不能刺激EPS的合成，只会降低合成的效率。;4. 较低温度时EPS A和EPS B的产量会增加，这是产EPS嗜温乳酸杆菌的共有特征。认为缓慢生长的细胞显现出缓慢的细胞壁复合物的生物合成，会