山大生化实验报告 实验十 菲林试剂热滴定糖.docVIP

生物化学实验报告——费林试剂热滴定糖 PAGE 4 费林试剂热滴定糖 姓名：周超 学号：201100140067 班级：11级生命基地 同组者：刘炳煜 时间：2011年5月21日 【实验目的】 1、初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。 2、正确掌握滴定管的使用方法和热滴定的终点。 【实验原理】 1. 还原糖 还原糖（reducing sugar ）：羰基碳（异头碳）没有参与形成糖苷键 能够还原斐林(H.von Fehling)试剂或托伦斯(B.Tollens)试剂(银氨溶液)的糖称为还原糖，所有的单糖（除二羟丙酮和五碳糖，即核糖和脱氧核糖），不论醛糖、酮糖都是还原糖。大部分双糖也是还原糖，蔗糖例外。斐林试剂是含 Cu2+络合物的溶液，被还原后得到砖红色 Cu2O的沉淀。托伦斯试剂被还原后（银镜反应）能生成单质银，在试管壁上可看到“银镜”。分子结构中含有还原性基团（如游离醛基`半缩醛羟基或游离羰基）的糖，叫还原糖。如葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖。 一般情况下，单糖的还原能力主要来自它的醛基，如葡萄糖，而多糖则大多因为半缩醛羟基的存在。还原后，自己会变成糖酸。如葡萄糖就会变成葡萄糖酸。 2. 菲林试剂 菲林试剂由氢氧化钠的质量分数为 0.1 g/mL 的溶液和硫酸铜的质量分数为 0.05 g/mL 的溶液，还有酒石酸钾钠配制而成的。它与可溶性的还原性糖(葡萄糖、果糖和麦芽糖)在加热的条件下，能够生成砖红色的氧化亚铜沉淀。因此，斐林试剂常用于鉴定可溶性的还原性糖的存在与否。 3. 实验方法 本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲、乙两种溶液组成。甲液含硫酸铜和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。 【实验试剂】 实验仪器 移液管（2ml、5ml、10ml） 100 毫升容量瓶 水浴锅 铁架台 碱式滴定管 分析天平 烧杯 玻璃棒 100ml锥形瓶 实验材料 面粉 酚酞试剂 菲林试剂（甲、乙液） 10%氢氧化钠 标准葡萄糖（1mg/ml） 6M HCl 碘液 【实验步骤】 1、总糖的提取 准确称取面粉1.0005克，加入6mol/L盐酸10毫升，加入蒸馏水15毫升，混匀。沸水浴30分钟后，取出几滴水解液用碘化钾-碘溶液检查水解是否完全，若水解完全，则不呈现蓝色。冷却后用10%氢氧化钠中和至中性溶液，定容至100毫升。准确吸取该溶液10ml，移入100ml容量瓶内并定容至刻度，即为测定总糖的样品液。 2、空白测定 吸取费林甲、乙液各5ml，加5ml蒸馏水，放入100毫升的锥形瓶中，再用滴定管加入8ml的标准葡萄糖液，混匀后电炉加热至沸腾，用标准葡萄糖以每滴4-5秒的速度滴定至蓝色消失。记录葡萄糖消耗总量，平行测定三次。 3、样品测定 准确吸取样品液 5ml 放于 100ml 锥形瓶内，加入费林甲液、乙液各 5ml，向锥形瓶内加入 4ml 的标准葡萄糖液，然后按测定空白同样操作进行滴定（控制流速，使滴定时间与空白滴定的时间基本一致），记下耗用标准葡萄糖的毫升 数。平行测定三次。 4、计算 【实验结果】 实验数据记录表 　 空白组 样品组 1 2 3 1 2 3 初始加入葡萄糖量/ml 9.00 9.00 9.00 4.00 4.00 4.00 标准葡萄糖滴定量/ml 0.32 0.29 0.25 0.95 1.00 1.00 葡萄糖消耗总量/ml 9.32 9.29 9.25 4.95 5.00 5.00 平均葡萄糖消耗量/ml 9.287 4.983 结果计算： 本次实验面粉中总糖含量为85.96% 【思考讨论】 结果分析： 本次实验结果在正常范围之内，实验较成功。 注意事项： （1）菲林试剂一般应现配现用，因为斐林试剂甲和斐林试剂乙混合后会因酒石酸有一定的还原性而自发地缓慢产生氧化亚铜沉淀。 （2）用酚酞作指示剂时用10%氢氧化钠调PH至7，应先计算大概需加入氢氧化钠溶液的体积，然后在接近拐点处应一滴一滴甚至半滴半滴的加，这样可以避免加入加入过量的氢氧化钠。 （3）全部滴定过程必须在沸腾状态下快速进行，避免不断的还原、氧化使滴定终点延后。 （4）滴定速度应保持在4-5秒每滴，因为反应时间较慢，变色速度慢，保持慢速滴入有利充分反应变色，避免加入量过多，造成实验结果误差太大。 （5）平行实验时，应尽量保持每次的滴定速度一致并且滴定时间相当，这样几次平行实验的误差不会太大，实验数据才有可参考价值。 （5）滴定速度不能太快，但是滴定时间要控制在3min之内，这需要正式滴定前进行预实验，摸索出适当