PRRSV重组NSP7蛋白ELISA检测方法的建立的中期报告.docxVIP

PRRSV重组NSP7蛋白ELISA检测方法的建立的中期报告 本中期报告主要介绍PRRSV重组NSP7蛋白ELISA检测方法的建立进展情况。 一、实验方法 1.1. 重组NSP7蛋白的表达和纯化 将PRRSV的NSP7基因片段克隆到表达载体pET22b(+)中，转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，诱导表达。利用离心、超声、纯化柱等方法获得重组NSP7蛋白。 1.2. ELISA检测体系优化 通过单因素试验和正交试验，优化ELISA检测体系各参数，包括NSP7蛋白的浓度、抗原包被时间、包被温度、试剂盛装量、酵素标记抗体浓度、底物种类及其浓度等。 1.3. 检测方法建立 采用间接ELISA方法建立PRRSV重组NSP7蛋白的检测方法。将纯化的重组NSP7蛋白包被至96孔ELISA板上，加入猪血清样品，再加入酵素标记抗猪IgG的二抗，最后使用TMB底物进行染色反应。 二、实验结果 经过实验，优化的ELISA检测体系包含NSP7蛋白的浓度为2 μg/mL，包被时间为12 h，包被温度为4℃，试剂盛装量为100 μL/孔，酵素标记抗体浓度为1:5000，TMB底物的浓度为1 mg/mL。 在此优化的条件下，检测PRRSV阳性血清的OD值平均为0.9，检测阴性血清的OD值平均为0.1，二者之间的差异显著。 三、下一步工作计划 1.4. 优化检测方法 进一步优化检测体系，包括抗原包被最佳时间和温