光学分析法—紫外可见分光光度仪（仪器分析技术课件）.pptxVIP

仪器分析——紫外可见分光光度法1 基本原理 紫外一可见分光光度法是利用物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析的方法。按所吸收光的波长区域不同，分为紫外分光光度法(200-400nm)和可见分光光度法(400-750nm)，合称为紫外一可见分光光度法。如有一生物试样含铁量为0.01mg?g-1。试样经处理后，用1.8?10-3mol?L-1的KMnO4溶液滴定，到达化学计量点时，所用KMnO4溶液的体积为0.02ml。而通常滴定管的读数误差就有0.02ml，显然用滴定法测定该试样中的含铁量是不合适的。但是，在适当的反应条件下加入一种试剂（如磺基水杨酸），使它与Fe3+生成紫红色螯合物，即可用吸光光度法测定其含量。比色分析的主要方法目视比色法：用眼睛来检测颜色的深浅比色分析光电比色法：以光电转换器件为检测器来区别颜色深浅的方法紫外?可见吸光光度法的特点具有较高的灵敏度 一般物质可测到10-5?10-6mol?L-1。适用于微量组分的测定。有一定的准确度 该方法相对误差为2%?5%，可满足对微量组分测定的要求。如一试样含铁量为0.020mg，相对误差5%，其含量在0.019?0.021 mg之间，该结果是令人满意的。操作简便、快速、选择性好、仪器设备简单。近年来由于新显色剂和掩蔽剂的不断出现，提高了选择性，一般不分离干扰物质就能测定。应用广泛 可测定大多数无机物质及具有共轭双键的有机化合物。在化工、医学、生物学等领域中常用来剖析天然产物的组成和结构、化合物的含量的测定及生化过程的研究等。仪器分析——紫外可见分光光度法1 基本原理一、光的基本特性 1.光的波动性光的干涉、衍射等现象无可争辩的表明光具有波动性，光既是波（是电磁波的一种），又是粒子，只有这样才能解释所有的光学现象。1.光的粒子性例题：计算波长为400 nm的电磁辐射的能量，分别用焦耳和电子伏特表示。2、单色光、复色光和互补色光如果两种颜色的光按适当的强度比例混合后组成白光，则这两种有色光称为互补色，如图 所示。成直线关系的两种光可混合成白光。 仪器分析——紫外可见分光光度法1 基本原理二、光与物质的作用1. 光的吸收 物质对光的选择性吸收的本质，可通过吸收光谱产生的原因来说明。物质都处于运动状态，分子内部的运动有三种，除价电子绕着分子轨道高速旋转外（电子运动），还有原子在平衡位置附近的振动（分子振动）和分子绕着其重心的转动（分子转动）。因此，一个分子的能量也包括三部分，即分子的电子能级的能量、分子振动能级的能量及整个分子转动能级的能量。分子中价电子能级间的能量差一般在1?20ev，这恰好是可见光和紫外光的能量。可见光常用于有色物质含量的测定。紫外光用于具有紫外吸收基团的无色物质含量的测定。振动能级间的能量差一般在0.05?1ev，相当于红外光的能量。而转动能级间的能量差一般在10-4?0.05ev，相当于远红外光及微波的能量。红外光谱常用于研究有机物的结构。分子内部各种能级能量的改变都是量子化的，因此当分子吸收能量之后受到激发，分子就从基态能级跃迁到激发态，即M（基态）+h??M*（激发态），而产生吸收谱线，因此紫外-可见吸收光谱是由于分子中价电子的跃迁而产生的。物质对光的吸收是物质的分子、原子或离子与辐射能相互作用的一种形式，只有当入射光子的能量与吸光体的基态和激发态的能量差相等时才会被吸收。由于吸光物质的性质不同，所以物质对光的吸收是有选择性的，不同物质的分子从基态跃迁到激发态所需的能量各有差异。故它只能选择性地吸收与之相当，即??= E2-E1=h?。例题：某分子中两个电子的能级差为1eV，若要电子在两个能级之间发生跃迁，需要吸收的光的波长是多少纳米？如果能级差为20eV，波长应多大？2.物质颜色的产生 溶液之所以呈现不同的颜色，是与它对光的选择性吸收有关。当一束白光（由各种波长的色光按一定比例组成）通过一有色溶液时，某些波长的光被溶液吸收。另一些波长的光不被吸收而透过溶液。人眼能感觉的波长在400?780nm，为可见光区。溶液的颜色由透过光波长所决定。例如，KMnO4溶液强烈地吸收黄绿色的光，对其它的光吸收很少或不吸收，所以溶液呈现紫红色。又如CuSO4溶液强烈地吸收黄色的光，所以溶液呈现蓝色。如溶液对白光中各种颜色的光都不吸收，则溶液为透明无色，反之，则呈黑色。 以上仅简单地用有色溶液对各种波长光的选择吸收来说明溶液的颜色。究竟某种溶液最易选择吸收什么波长的光？ 仪器分析——紫外可见分光光度法1 基本原理三、光谱吸收曲线以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图可得一曲线，如图课本上的高锰酸钾溶液的吸收图所示，称为光吸收曲线。 图中I、II、III代表被测物质含量由低到高的吸收曲线。每种有色物质溶液的吸收曲线都有一个最