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乌梅丸拆方治疗溃疡性结肠炎的实验研究
溃疡性胃炎(iu)是一种肠管疾病,主要表现为腹泻、粘膜脓血便、腹痛、急性腹泻和后重量。目前,西医治疗溃疡性结肠炎以氨基水杨酸制剂、糖皮质激素和免疫抑制剂为主,但效果不甚理想且容易复发。溃疡性结肠炎根据其临床表现可归入中医学“肠澼”、“下利”、“痢疾”等范畴,在中医辨证论治思想的指导下,其临床疗效显著。乌梅丸、白头翁汤、半夏泻心汤等经典方剂已被临床及实验研究证明有显著疗效。溃疡性结肠炎临床表现以寒热错杂证最多,治疗以乌梅丸加减应用最多,乌梅丸的组方体现中医多种治法,根据寒热药性及治法的不同可拆方为以下五组:(1)温热组:细辛、干姜、桂枝、附子、蜀椒;(2)苦寒组:黄连、黄柏;(3)补益组:人参、当归;(4)收敛组:乌梅;(5)寒热并用组:细辛、干姜、桂枝、附子、蜀椒、黄连、黄柏。本实验通过观察乌梅丸及其拆方对溃疡性结肠炎的治疗作用,探讨不同治法的作用机制及寒热并用在乌梅丸方中的配伍意义。
材料和方法
1. 材料表面
1.1 动物
SPF级雄性SD大鼠115只,体质量(220±20)g,合格证号:SCXK(陕)2007-001,西安交通大学实验动物中心提供。
1.2 特效药
1.3 测定活性化合物的测定
2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)(美国SIGMA公司)。髓过氧化物酶(MPO)、白介素10(IL-10)(上海西唐生物科技有限公司)。肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素1(IL-1)(上海森雄科技实业有限公司)。前列腺素2(PGE2)(陕西永屹生物科技公司)。超氧化物歧化酶(SOD)、考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。水合氯醛(上海山浦化工有限公司)。
1.4 仪器、检测系统
酶标仪ELX808(美国Bio-Tek公司);超声波细胞粉碎机(JY92-Ⅱ,宁波新芝生物科技公司);721分光光度计(上海天美科学仪器公司);图像采集系统(NIKON.ACT-1 DXM1200日本尼康公司);光学显微镜(蔡司光学仪器(上海)公司)。
2. 方法
2.1 用于制造模型药物的制备
将5%的TNBS水溶液与无水乙醇按比例配制成50%的TNBS/乙醇溶液;水合氯醛晶体溶于蒸馏水分别配制成5%和10%的混悬液。
2.2 人参中药
乌梅丸方:乌梅16g,细辛6g,干姜10g,桂枝6g,附子6g,蜀椒4g,黄连16g,人参6g,当归4g,黄柏6g。各拆方按原方比例及文献报道剂量配制,含附子的先煎30min;大承气汤:大黄12g,厚朴24g,枳实12g,芒硝9g,先煎厚朴、枳实,后下大黄,溶入芒硝;各方煎煮后过滤及水浴蒸发制成1g/m L生药的水煎液,高温灭菌后4℃冰箱保存备用。
2.3 大承气汤两组联合给药
115只SD雄性大鼠分为正常组、模型组、乌梅丸组、温热组、寒凉组、寒热并用组、补益组、收敛组。正常组10只,其余各组均15只。除正常组外,其余各组先进行脾胃虚寒模型,造模方法根据文献报道进行改进:各大鼠按照大承气汤每日9.5g/kg灌胃,灌胃10d后进行溃疡性结肠炎的造模。造模8h后,各组开始灌胃给药,给药剂量参考文献按10倍人体剂量给药,乌梅丸组每日给乌梅丸方13.3g/kg(相当于原生药量);温热组给温热方5.33g/kg;苦寒组给苦寒方3.67g/kg;收敛组给收敛方267g/kg;补益组给补益方水煎剂1.67g/kg;寒热并用组给寒热方9.0g/kg;空白组、模型组均给予0.9%氯化钠溶液10m L/kg。共10d。
2.4 指标的检测
2.5 统计方法
采用SPSS 17.0处理数据,计量数据采用表示,采用方差分析;频数资料采用卡方检验,P0.05为差异有统计学意义。
结果
1. 一般行为
2. 采用“五梅”法对脆胀性肠球菌的死亡率、体重、肠指数和溃疡面积的影响
3. 对大鼠进行tnf-和il-1含量的影响
见表2。与空白组比较,模型组大鼠体温、TNF-α、IL-1含量均显著升高(P0.05);与模型组比较,乌梅丸组、寒热并用组、寒凉组、补益组大鼠体温、TNF-α、IL-1含量均显著降低(P0.05),以乌梅丸组最显著,其次为寒热共用组和寒凉组,收敛组仅表现出趋势;温热组大鼠体温显著升高,TNF-α、IL-1含量降低(P0.05)。
4. 各组大鼠的脾指数、尾腺指数的比较
见图1。与正常组比较,模型组大鼠脾指数升高(P0.05);与模型组比较,乌梅丸组、寒热并用组、温热组、寒凉组和补益组脾指数均降低(P0.05),其中以乌梅丸组和寒热并用组作用最明显(P0.05),收敛组仅表现出降低趋势。
见图2。与正常组比较,模型组大鼠胸腺指数降低(P0.05);与模型组比较乌梅丸组、寒热并用组、温热组和补益组胸腺指数升高(P0.05),且组间无差异;寒凉组和收敛组无统计学意义。
5. 各
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