聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳.pptVIP

聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳第一页，共二十四页，2022年，8月28日 2、基本原理2.1蛋白质的等电点蛋白质属于一种两性电解质.在不同的pH环境中所带的正负电荷不同。若在某特定的pH环境中其净电荷为零,此时的pH为该蛋白质的等电点。在电场下不泳动。第二页，共二十四页，2022年，8月28日 2.2.等电聚焦在常规电泳中,通常只是在恒定的缓冲液中进行分离，假定有A, B两个蛋白质组分，分别带有净电荷-3和+1。在一个pH9的缓冲洗脱中,带负电荷的蛋白质均放在靠阴极一侧电泳,此时带负电荷多的A蛋白质受阳极影响大,泳动速度比B快,最终会超过B，这样二者就会得到分离。在等电聚焦电泳中，分离是在连续的pH梯度中进行的。如果把A,B二者的混合物放在一个pH3.5-10的pH梯度中的pH6的位置，则A蛋白质的净电荷为-2,减少两个净电荷；B蛋白质的净电荷为+2，多了两个净电荷。在相同的电场下,A移向阳极,B移向阴极，当它们达到净电荷为零时停止迁移，这种行为称为聚焦反应。第三页，共二十四页，2022年，8月28日 蛋白质在等电聚焦电泳中的分离仅仅决定于其等电点，这是一个”稳态”过程,一旦达到等电点的位置，蛋白质就会停止迁移。达到稳态后，如果它要正极或负极任何一侧扩散，均会受到相应的pH制约，即若向负极扩散带负电,会受到阳极的影响，迫使其扩散后退回原位;若向正极扩散带正负电,会受到阴极的影