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基于DNA环调控的rrnB P1嵌合启动子表达载体的构建及应用的中期报告
DNA环调控与基因表达调控密切相关,它是细胞适应环境变化和维持稳态的重要机制之一。本项目旨在构建一种基于DNA环调控的rrnB P1嵌合启动子表达载体,并利用其在大肠杆菌中进行基因表达调控的研究。
在实验中,我们首先设计合成了不同长度的DNA环片段,并利用PCR技术将它们嵌合到rrnB P1启动子上,形成了一系列带有DNA环的启动子片段。随后,利用限制性内切酶和连接酶等方法,将目标启动子片段克隆进入表达载体pET28a中。
为了验证该载体的功能,我们选择了一种模型蛋白质进行了表达实验。结果表明,在添加不同浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)后,该载体可实现对目标基因的不同水平表达调控。此外,通过Western blot和SDS等技术进行检测,我们发现该载体能够有效表达目标蛋白,证明了其在大肠杆菌中进行基因表达调控的可行性。
总体而言,本项目初步验证了基于DNA环调控的rrnB P1嵌合启动子表达载体的可行性、稳定性及表达效果,并为下一步相关研究提供了基础实验数据。
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