基于pdda-碳纳米管胆碱氧化酶的电流型胆碱生物传感器.docxVIP

基于pdda-碳纳米管胆碱氧化酶的电流型胆碱生物传感器 1 碳纳米管及其应用 胆矩阵是生物组织中重要的神经传递要素。它是神经系统中重要的神经传输要素，通常用于研究脑组织中的胆囊功能活动。这是临床医学检测的一个重要指标，对于血液、血清、胆囊、脑脊液、隋物和药物的测定和分析，具有重要意义。 胆碱传感器的原理是胆碱氧化酶(Ch Ox)催化胆碱氧化反应产生甜菜碱(Betaine)和H2O2,反应如下: 在测量电位为+0.6~+0.8 V(vs.Ag/Ag Cl)时,H2O2在电极表面发生电化学氧化反应产生电子,产生的电子转移到电极表面即产生安培电流,根据电流的大小可以测定胆碱的含量。因此,只要将Ch Ox固定在电极表面即可构建测定胆碱的生物传感器。 多壁碳纳米管(Multi-wall nanotubes,MWCNTs)是一种具有优异导电性、吸附性、生物相容性等特性的纳米材料,将其引入传感器领域,极大促进了生物传感器的研究与发展。目前,已经制备了多种基于碳纳米管的高性能生物传感器。采用超声波降解法,碳纳米管能够通过π-π键或者静电吸附等非共价键分散在一些溶剂中。此法不容易破坏碳纳米管的内部结构,能更好地保持其良好的生物相容性等优良特性。目前,已有的分散剂为壳聚糖、聚四氟乙烯(Nafion)、聚丙烯酸(Poly(allylamine),PAA)、聚乙烯亚胺(Poly(ethyleneimine),PEI)、聚二烯丙基二甲基氯化铵(Poly(diallydimethylammonium chloride),PDDA)等[5~10]。PDDA是一种带正电荷的高分子聚电解质,其可以通过π-π键与碳纳米管结合,从而提高碳纳米管在水中的分散性。本实验以PDDA分散多壁碳纳米管,制成分散均匀的PD-DA-MWCNTs悬浮液,胆碱氧化酶的等电点是4.5,在0.10 mol/L p H 8.0的缓冲液中带负电,因此可以将带正电的PDDA-MWCNTs与带负电的Ch Ox层层自组装制备胆碱传感器,最后滴加0.05%Nafion以制备抗干扰膜,本方法较好地保持了酶活性,能精确控制固定酶量,制备的胆碱传感器酶电极具有灵敏度高、线性范围宽等特点。 2 实验部分 2.1 sem及试剂 Potentiostat/Galvanostat 283A型电化学测试系统(美国EGG公司);PG-1A金相试样抛光机(上海金相设备有限公司);EM400ST型TEM透射电子显微镜(Philips公司);QUANTA200型SEM扫描电子显微镜(FEI公司)。 Ch Ox(14 Units/mg)、PDDA、Nafion、对乙酰氨基酚(AP)、抗坏血酸(AA)均购自Sigma Adrich公司;氯化胆碱(上海三爱思试剂有限公司);MWCNTs(O.D.=20~30 nm,长度0.5~1μm,中国科学院成都有机化学有限公司,纯度95%);尿酸(UA,Fluka公司);0.10 mol/L磷酸盐缓冲溶液(PBS,p H 8.0)。所用试剂均为分析纯。实验用水为二次蒸馏水。 2.2 恩赞茨传感器的制备 2.2.1 分散液sda-rcns的制备 2.2.2 电极表面的装饰 2.3 传感器对碱的响应 电化学检测采用三电极工作系统:酶电极为工作电极,Ag/Ag Cl为参比电极,铂丝(ue7881 mm)为对电极;向PBS(p H 8.0)测试底液中连续加入胆碱溶液,在+0.6 V(vs.Ag/Ag Cl)下测定传感器对胆碱的响应电流;同时进行磁力搅拌,以使胆碱均匀扩散。所有实验均在室温下进行。 3 结果与讨论 3.1 apec运动学 将MWCNTs分散在PDDA中,形成黑色的PDDA-MWCNTs悬浮液。由图1A可见,MWCNTs被均匀分散;由图1B可见,PDDA分散的MWCNTs与酶可以通过自组装的方式吸附在酶电极表面,并镶嵌在酶层中。 3.2 复合酶膜响应电流 图2为被不同层数PDDA-MWCNTs/Ch Ox复合酶膜修饰的胆碱传感器对2×10-3mol/L胆碱溶液的响应电流的直方图。由图2可知,在1~6层时,响应电流随复合酶膜层数增多而增大,6层时响应电流达到最大,继续组装复合酶膜响应电流会变小。这是因为在1~6层时,随着PDDA-MWCNTs/Ch Ox复合酶膜层数的增多,固定的酶量逐渐增多,催化底物产生的电子增多,响应电流随之逐渐增大;当复合酶膜PDDA-MWCNTs/Ch Ox层数大于6时,复合酶膜PDDA-MWCNTs/Ch Ox会阻碍电子的传递,电极和底物之间电阻逐渐增大,故而电流随之减小。因此本实验选择6层PDDA-MWCNTs/Ch Ox修饰的酶电极进行测定。 3.3 扫描速率的影响 图3为(PDDA-MWCNTs/Ch Ox)6在含2.0×10-3mol/L胆碱的0.10