光合细菌的基本特性及在水产养殖上的应用.docxVIP

责任编辑 刘红芹光合细菌是一大类能在厌氧条 件下进行不产氧光合作用的细菌的总称，包括红螺菌科、着色菌科、绿硫菌科和绿色丝状菌科，由于它有能利用硫化氢、氨氮、有机酸等小分子有机物快速生长且菌体本身具 有营养丰富、无毒无害等特点，因 而在水产养殖上得到了广泛应用。目前水产养殖中用的光合细菌主要是红螺菌科的光合细菌，如沼泽红 假单胞菌、荚膜红假单胞菌、球形 红菌等，常用来净化水质、防治疾病和促进水产动物的生长，效果比 较明显。然而长期以来，光合细菌水产制剂却没有一个统一的质量标准，造成产品质量参差不齐，甚至时有掺假使杂现象发生，严重危害到水产养殖和光合细菌产业本身的 粒的干扰。 目前已有学者开始探讨光合细菌的计数方法。如孙军德等人建立的双层平板计数方法和光电比浊法的数学模型，但这些方法都是建立在对实验室某一纯培养物的研究基础上，培养基有很大的局限性，并不适用于光合细菌的其它菌种的检测，更无法应用于复杂的水产制剂的检验，离实际应用还有一定的距离。 准确的光合细菌活菌计数只能采用菌落计数法。要建立一个标准的光合细菌检测方法，必须作如下几个方面的研究：一是培养基配方，光合细菌在该培养基上能产生唯一的可识别的菌落特征；二是该配方对同一类的不同菌种，至少是实际中常用的同类菌种的适应性；三是其它相关种类的细菌在该培养基上有无干扰现象；四是培养容器、培养条件的确定。 我们以沼泽红假单胞菌、球形红假单胞菌、荚膜红假单胞菌 为模型，研究出了光合细菌的通用检测培养基即Ｒ培养基，同时用红酵母、 深红酵母、桔橙色动球菌、棕褐小单胞菌、沙门氏菌、志贺氏菌、大肠杆菌、副溶 血弧菌、 溶藻弧菌等多种细菌作了干扰性试验， 结果表明只有光合细菌才能在Ｒ培养基上产生红色的菌落，该培养基对光合细菌 的检测具有专一性和特一性，可用于光合细菌纯培养物及水产制剂的准确计 数。在确定培养基的基础上，我们还确定了培养的容器和培养条件等因子，最终建立了光合细菌的计数方法，即半固体试管法检测光合细菌。 本文提供的光合细菌菌落计数的方法如下。１、适用范围 广西出入境检验检疫局检验检疫技术中心刘军义 汪文龙 李娟 科技与推广健康发展。其中关键的技术指标即活菌密度的标注，更是十分混 乱，从１０亿／毫升到１００亿／毫升不等，令渔民无所适从。究其原因，主要是没有一个准确的检测方法所致。传统的细菌计数方法有显微镜直接计数法、平板菌落计数法和光电比浊计数法三种。 显微镜直接计数法采用血球计数板来计数， 不仅计数误差大，而且不能分辨杂菌。平板菌落计数法，适用于需氧细菌总数的检测，但对于厌氧的光合细菌，则不易培养，此外，培养过程中由于长时间光 照，易导致培养基渗水而计数不准。光电比浊法则更不可靠，一方面既不能分辨杂菌，又不能区分死菌；另一方面既受掺假色素的影响，又受物理性颗 ——半固体试管法５３００２１ 《中国水产》２００３年第１１期 ６９ 责任编辑 刘红芹 本方法适用于各种红螺菌科光合细菌的纯培养物及其水产制剂的光合细菌菌落计数。 ２、培养基：Ｒ培养基。乙酸钠 ３．０ｇ碳酸氢钠１．０ｇ 氯化铵 １．０ｇ磷酸氢二钾 ０．５ｇ氯化镁 ０．２ｇ氯化亚铁－ＥＤＴＡ ０．００５ｇ氯化钠５．０ｇ抗氧化剂 ０．２５ｇ琼脂粉 ８ｇ 蒸馏水 １０００ｍＬ ｐＨ ７．４±０．２１２１℃，灭菌１５分钟。３、操作程序参照ＳＮ０１ ６８－１９９２方法进行。 （１） 制品样品匀液以无菌操作取２５ｍＬ样品，放入装有２２５ｍＬ稀释剂的灭菌均质杯内，混匀，制成１：１０的样品匀液。 （２） 稀释样品匀液 用１０ｍＬ灭菌吸管准确吸取１：１０的样品匀液１０ｍＬ，放入装有９０ｍ Ｌ稀释剂的三角瓶中，混匀，制成１：１００的样品液，以此类推，将菌液稀释至１０－６，１０－７，１０－８。 （３）试管接种 选用合适的连续三个稀释度的菌液进行试管计数。分别用灭菌吸 管吸取１ｍＬ菌液放入２５ｍＬ具塞比色管内，每个稀释度的菌液用两根试管。迅速倾注２０ｍＬ的Ｒ培养基（已放４５±１℃的水浴中恒温）于管内，等冷却后，再加入５ｍＬ１％ 近年来水产养殖业发展迅速，由传统的自然放养转向高密度集约化饲养，水产饲料的需求量不断攀升，大量的集约化饲养几乎全靠人工饲料，然而，人工饲料与传统的天然饲料相比，其风味和适口性往往存在很大差异，而且不同的水产动物其喜好各不一样。在不同水生动物饲料中添加不同诱食成分即诱食剂，用来提高饲料产品的诱食作用是当前水产饲料生产中面临的主要问题之一。目前人们将诱食剂定义为具有使鱼趋向饲料周围的化学物质；而具有促进开始摄食、持续和吞入等一系列摄饵行为的化学物质叫做促摄饵物质。对于鱼来说具有引诱和促进两种性质的活性物质较 多，所以可统称为诱食剂。本文就 目前水产动物诱食剂研究状况作一综述。一、诱食剂作用的生理机制水产动物摄食过程分三