水稻rna原位杂交体系的建立.docxVIP

水稻rna原位杂交体系的建立 原位异交技术是生物和细胞遗传因素结合的产物。原位杂交技术由Southern杂交技术和Northern杂交技术衍生而来,是用标记过的探针对组织切片中的mRNA或DNA进行原位定位。继生物素标记探针技术和杂交位点的酶信号检测技术之后,又出现了利用酶标抗体进行检测的标记系统,这种方法可以将杂交信号放大50倍以上,灵敏度极高。Reader等用荧光素标记探针,荧光信号可以直接在荧光显微镜下检测,比酶检测系统更加快捷。此后Mukai等又发展了植物的多色荧光原位杂交技术。Schwarzacher等成功地将基因组原位杂交技术(GISH)应用于植物远缘杂交的研究中。此后,GISH被广泛应用于不同遗传背景中外源染色质的结构空间组成、减数分裂行为、异源多倍体进化、染色体作图等方面的研究。原位杂交是一种在组织水平上研究基因表达的最直接、有效的技术,因而得到了越来越广泛的应用。 原位杂交体系的优化有利于植物品种亲缘关系的鉴定、功能基因的定位以及基因对外界刺激的响应研究等。为了能准确、快捷地研究目标基因在水稻中的表达模式,本文优化了水稻RNA原位杂交体系,为基因时空表达研究奠定了基础。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 植物材料 水稻(Oryza sativa)品种为‘日本晴’,取样时期为苗期,取样部位为第一片完全展开叶中段和发育成熟根的根尖。 1.1.2 go30