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流式荧光原位杂交法检测细胞端粒长度 端粒是真核生物染色体线性dna分子末端的一种特殊结构，通常由简单的tg重复序列和相关蛋白质组成。它的主要功能是维持染色体的稳定性和dna复制的完整性。已知端粒缩短是引起细胞衰老和生物衰老的分子机制之一,大量与端粒相关的研究已见诸报道,而测量端粒的长短则成为研究端粒特性的重要手段之一。Rufer首次采用流式荧光原位杂交法(flow fluorescent in situhybridization,Flow-Fish)测定端粒长度,该法灵敏简单,操作快捷,重复性好。为研究该方法的可行性,本实验采用Flow-Fish方法对不同小鼠的端粒长度进行测定,并通过原位定量荧光杂交(quantitative fluorescent in situ hybridization,Q-Fish)方法和SYBR Green定量RCR方法进行了验证。 1 材料和方法 1.1 材料表面 1.1.1 聚丙烯腈基聚糖pangene 肽核酸(Peptide nucleic acid,PNA)探针购自韩国Panagene公司,序列为CCC TAA CCC TAA CCC TAA,C末端FITC荧光标记;SYBR Green Mix购自东洋纺公司;右旋糖购自美国Sigma公司;其余试剂均为国产分析纯。 1.1.2 院实验动物中心 C57BJ/6小鼠购自军事医学科学院实验动物中心[S