病毒的分离方法.docxVIP

病毒的分别方法 一般状况下分别病毒能够用传代细胞、原代细胞或许直接用动物接种或许鸡胚接种，只有在 找不到合适病毒生长的原代细胞或许传代细胞的状况下才运用动物接种或许鸡胚接种的方法分别病毒。 大概过程应当是这样的： 第一获得病毒分别样品，这个要求比较高，采集后假如不可以立刻操作则一定低温保留，并 赶快送实验室操作。此外也能够冷冻保留，一般状况下病毒是不简单冻死的。自然某些特别病毒除外，这需要查阅有关资料。 第二病毒分别操作，将获得病样研磨，并冻融起码一次，自然研磨过程中一定低温。同时 研磨应充分，在研磨时能够加入生理盐水或PBS或许直接加细胞培育液，研磨完整后冻融一 到三次，冻融的目的是为了让细胞完整破碎将细胞内的病毒开释到溶液中。而后低速离心， 取上清用0.22微米的滤膜过滤，去过滤后的液体接种细胞。此时须注意，其实不是全部病毒 接种是都需要让细胞完整长满细胞瓶，一般是不可以产生细胞病的病毒最幸亏细胞长到40%左 右接种，而能产生细胞病变的则需要完整长满细胞瓶此后再接种病毒。接种过程中为防止污 染能够加入双抗，或许其余抗生素。 第三接种后察看，某些能产生细胞病变的病毒很简单察看，直接在显微镜下就能看能否分别成功；假如病毒不产生细胞病变，则需要用其余的方法来检测，比方可用荧光抗体染色、PCR或许其余方法。可是大多数状况下第一代都不简单看到或许成效不好，这时你能够再传 几代试一试。假如再传四~五代此后都没有的话，那恭贺你，你失败了，或许你的方法有问题，或许根本就没有你要分别的病毒，或许在分别过程中你的病毒就已经死了。 用细胞分别病毒大体就是这个过程，自然某些病毒可能还没有相应的传代或许原代细胞，如 果要分别就只好用易感人物了，操作都是相像的，不过都是采样、样品办理、接种、接种后 检测察看、采集病毒而已。上边说到的方法都是从动物组织中分别，自然假如不是组织，比 如你要从粪便或许尿液或取的拭子上分别，则可直接将其用生理盐水、PBS或细胞培育液稀 释（要尽量摇匀假如是拭子的话应多挤压摇匀）而后离心取上清过滤接种细胞就能够了。