复方海蛇胶囊与多巴丝片合用对帕金森病大鼠的增效减毒作用.docxVIP

复方海蛇胶囊与多巴丝片合用对帕金森病大鼠的增效减毒作用 帕金森病（parkinson’sdisease，pd）是由遗传诱导和多种环境因素引起的神经系统退行性疾病。左旋多巴药物仍然是治疗pd的首选药物。但是该类药物不能阻止PD的自然发展进程,而且随着用药时间延长疗效逐渐衰减,迫使患者不断增加用药剂量,致使出现“剂末现象”、“开-关现象”以及恶心、呕吐、腹痛、便秘等胃肠道副反应。如果长期服药则副作用更明显。因此,减少左旋多巴类药物的用量,改善其毒副反应,对该病的治疗具有重要意义。复方海蛇胶囊,由海蛇、海参、远志、石菖蒲等药物组成,具有益智、抗氧化、清除自由基、保护神经细胞等多方面的作用。已有的研究发现,中西药合用治疗PD不仅可以增强疗效,而且可以减轻西药的副作用。本文研究了复方海蛇胶囊与多巴丝肼片(美多芭)合用对帕金森病大鼠的影响,并探讨两药合用的增效减毒作用及其机制。 1 材料和方法 1.1 复方制剂—药物 复方海蛇胶囊(批号国药准字Z2000013)由浙江杭康药业有限公司提供;多巴丝肼片(左旋多巴与脱羧酶抑制剂苄丝肼盐酸盐按4∶1比例组成的复方制剂,美多芭R,批号:052000)上海罗氏制药有限公司产品;6-羟基多巴胺(6-OHDA,批号:055K3738)、阿朴吗啡(批号:103K1033)均购自Sigma公司。 1.2 许可证号scxk浙 SPF级SD雄性大鼠,浙江省实验动物中心提供,许可证号SCXK(浙)2003-0001,体重180~220 g。动物分笼饲养,保持12h昼夜节律,室温(22±1)°C,自由饮水摄食。 1.3 微量进样器精密仪器 DW-5脑立体定位仪(成都泰盟科技有限公司);微量进样器(上海精密仪器厂);ESA高效液相色谱电化学检测器、C18反相色谱柱(250mm×4.6mm,5μm,江苏汉邦科技有限公司)。 1.4 前后装设骨锚机,把选择一个gl-1的联合注射,造成治疗组 将大鼠腹腔注射水合氯醛(350mg·kg-1)麻醉后,严格平颅位固定于大鼠脑立体定向仪上,常规消毒后,剪开头皮,剥离骨膜。以前囟为准,根据《大鼠脑立体定位图谱》,确定右侧黑质2个二坐标:(1)前囟后4.8mm,矢状缝右侧1.5mm,颅骨骨膜下8.5mm;(2)前囟后4.8mm,矢状缝右侧2.5mm,颅骨骨膜下8.0mm。脑外科电动颅骨钻钻孔,用10μL的微量注射器抽取6-OHDA 6μL(用0.2%维生素C当天配置,使其浓度为4μg·μL-1),每点注射3μL,注射速度1μL·min-1,留针10min,缓慢退针,缝合手术创口。常规饲养1周后进行行为学检测,大鼠腹腔注射阿朴吗啡(0.5mg·kg-1),10min后开始计数旋转圈数,共记录30min,若旋转频率≧7次/分,即成功造模。 1.5 大鼠单检试验 将造模成功的大鼠随机分成4组,每组10只:模型对照组、美多芭组(美多芭85mg·kg-1)、复方海蛇胶囊+美多芭合用1组(复方海蛇胶囊400mg·kg-1+美多芭40mg·kg-1)、复方海蛇胶囊+美多芭合用2组(复方海蛇胶囊800mg·kg-1+美多芭40mg·kg-1)。连续灌胃给予治疗药物28d。另外取10只大鼠按上述“1.4”方法注射6μL生理盐水作为伪手术对照组。伪手术对照组和模型对照组连续灌胃给予等量生理盐水28d。 1.6 行为测试 末次给药24h后再次作行为学检测。大鼠腹腔注射阿朴吗啡(0.5mg·kg-1),10min后开始记录旋转圈数,共记录30min。 1.7 高效液相电化学法检测其它叶片活性化合物 在实验结束后,将各组大鼠颈椎脱臼处死后断头取脑,于冰盒上分离并保留纹状体组织,将组织样品准确称量后转入2m L Eppendorf管中,加入冰冷0.2mol·L-1HCIO4400μL、内标溶液(6-DHBA)50μL、双蒸水50μL,冰浴中超声破碎后,4℃条件下13000r·min-1离心30min,取上清液进行高效液相电化学法检测多巴胺(DA)及其代谢产物二羟基苯乙酸(DOPAC)和高香草酸(HVA)的含量。 1.8 胃推进指数测定 大鼠进行行为学检测后禁食12h,给予墨汁(10m L·kg-1)灌胃,30min后将大鼠颈椎脱臼处死,剖腹取出全部胃肠道,测量并计算无张力下胃肠推进指数(墨汁前端至幽门括约肌距离/幽门括约肌至肛门距离×100%)。 1.9 数据计数 应用SPSS11.5统计,各组数据均以均数±标准差表示,采用方差齐性检验,组间比较采用t检验。 2 结果 2.1 大鼠美多大学生美多大学生中美多大学生使用剂量的影响 如表1所示,模型对照组大鼠30min内的平均旋转圈数是280圈,与模型对照组相比,美多芭组、复方海蛇胶囊与美多芭合用不同剂量组PD大鼠明显减少旋转行为,改善帕金森病症