抑制人cFLIP基因表达的shRNA腺病毒的构建与功能验证的中期报告.docxVIP

抑制人cFLIP基因表达的shRNA腺病毒的构建与功能验证的中期报告 本研究旨在构建一种能够抑制人cFLIP基因表达的shRNA腺病毒，并对其功能进行验证。中期报告主要介绍实验的进展情况和结果。 【材料与方法】 1. shRNA序列的设计：通过在线设计工具设计出两种能够特异性靶向人cFLIP基因的shRNA序列。 2. 腺病毒载体的构建：将设计好的shRNA序列克隆到含有U6启动子和GFP报告基因的pLKO.1-puro载体中，构建出稳定的shRNA表达载体。 3. 293T细胞的包装与支付：将shRNA表达载体与辅助腺病毒包装载体（psPAX2和pMD2.G）共转染到293T细胞中，用收集的包装病毒粒子被送入目标细胞。 4. Western Blotting：将不同组的细胞收集后，进行蛋白质提取，然后分别进行Western Blotting检测cFLIP的表达水平。 【结果】 1. 成功构建出含有两个shRNA序列的pLKO.1-puro载体。 2. 成功包装出含有shRNA的腺病毒粒子。 3. 成功用Western Blotting检测到cFLIP基因表达被抑制的现象。 【讨论与结论】 通过本研究中间的实验结果，我们证明了我们构建的shRNA对于cFLIP基因的表达有抑制作用，并且成功的将shRNA载体克隆到腺病毒中，使其能够被送入目标细胞中。我们将继续进行更深入的研究，探讨该shRNA腺病毒在治疗部分癌症方面的实际应用。