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balbc小鼠遗传污染对单克隆抗体制备实验的影响 由于动物在附近的杂交系统中非常一致，并且具有相同的实验反应，我们可以消除混合遗传背景对实验结果的影响。因此，只有少数动物才能获得有效的实验结果，因此附近的动物受到了高度重视。 BALB/c近交系小鼠,为近交系当中应用数量最多的一个品系,广泛应用于肿瘤学、生理学、免疫学和核医学等领域。在单克隆抗体和生物制品鉴定中为指定的实验动物。 如果使用遗传污染或者遗传变异的近交系小鼠,会导致实验数据不准确,结果不可靠,最终导致实验失败。所以近交系小鼠的遗传质量至关重要。我单位从某动物中心购买了两批6~8周龄的BALB/c小鼠,第一批用于制备单克隆抗体,未见腹水产生(经更换动物后验证,排除了实验枝术等方面的原因)。从第二批动物经生物特性(毛色光泽、体形、体重)分析与BALB/c近交系相差甚远,进行遗传质量检测后发现有大部分生化位点发生了遗传污染,未再进行实验。 1 材料和方法 1.1 小鼠和大鼠的遗传检测 第一批清洁级6~8周龄BALB/c小鼠466只,雄鼠158只,雌鼠218只,第二批清洁级 6~8周龄BALB/c小鼠305只,雄鼠101只,雌鼠204只。 从第一批BALB/c小鼠中,随机抽取6只(非统计学意义的随机,遗传检测是针对近交系的种群而言,如果有两个或两个以上位点的标记基因与标准遗传概貌不一致,则判断该动物遗传质量不合格),雄雌各半,进行遗传生化位点检测。从第二批BALB/c小鼠,随机抽取16只,雄雌各半,做遗传生化位点检测。 1.2 电泳方法和染色 碱性磷酸酶-1(Akp-1)等13个生化位点的名称和电泳条件及染色方法见GB/T14927.1-2001。 2 balb/c小鼠遗传生化位点检测 2.1 两批清洁级BALB/c小鼠碱性磷酸酶-1(Akp-1)等生化位点检测结果 依据国家标准对该品系进行碱性磷酸酶-1等13个生化位点检测。结果发现BALB/c小鼠Ce-2、Es-3、Gpi-1、Pgm-14个生化位点发生遗传污染,结果见表1。 第一批遗传污染的BALB/c小鼠,共检测碱性磷酸酶-1(Akp-1)等13个生化位点,从表1可以看出,Akp-1、Car-2、Es-1、Es-10、Gpd-1、Hbb、 Idh-1、Mod-1、Trf等 9个生化位点与标准对照一致,而Ce-2生化位点标准为a型,出现b型基因频率为67%。Es-3生化位点标准为a型,但在检测的小鼠中大部分出现了c型,c型的基因频率为67%,Gpi-1生化位点标准为a型,出现b型的基因频率为67%,Pgm-1生化位点标准为a型,b型基因出现频率为16%,说明BALB/c小鼠这4个遗传生化位点被污染,有外来基因Ce-2b型,Es-3c型, Gpi-1b型,外来基因的占有率为67%,证明遗传污染的时间比较长,占有率比较大。 第二批BALB/c小鼠取16只,雄雌各半,对该品系进行碱性磷酸酶-1(Akp-1)等13生化位点检测。实验检测结果见表2。 从表2可以看出Akp-1、Es-1、Idh-1、 Gpd-1、Trf等5 个生化位点与标准对照一致,而Car-2、Ce-2、Es-3、Es-10、Gpi-1、Hbb、 Mod-1、Pgm-1等8个生化位点发生遗传污染,其中杂合基因Car-2ab型为38%, Es-3ac 型为44%, Gpi-1ab型为13%,Hbb sd型为38%,Pgm-1ab型为44%,有外来基因频率Car-2a型为31%,Ce-2b型为13%,Es-3c型为28%,Es-10b型为25%,Gpi-1b型为31%,Hbb d型为25% Mod-1b型为50%,Pgm-1ab型为22%,从实验结果来看这批动物发生了严重的遗传污染。 3 讨论 3.1 小鼠生物特性检测结果 遗传质量合格的BALB/c小鼠基因位点纯合、遗传组成同源,是制备单克隆抗体最理想动物。但在这次制备单克隆抗体实验中管理人员发现,第一批BALB/c小鼠的体形与以往的 BALB/c小鼠不同,体形大,生长速度快,毛色光泽、被毛浓密,按照常规制备单克隆抗体未成功(经更换动物后验证,排除了实验技术等方面的原因);第二批BALB/c小鼠生物特性与第一批相同,雄性的体重(24.1~40.1g)平均为36.1g,雌性的体重(18~24g)平均为19.75g,而正常BALB/c体形小,生长速度慢,被毛疏松,雄性的体重仅17.40~25.0g,雌性的体重14.75~18.16g,因此对这批BALB/c小鼠产生怀疑未进行实验。经对这两批 BALB/c小鼠进行碱性磷酸酶-1(AKP-1)等13个位点检测发现,第一批动物4个生化位点出现了杂合基因,第二批动物有8个生化位点出现了杂合基因,证明该品系已发生严重遗传污染。 3.2 遗传污染可能会与实验动物生产质量检测的关