单增李斯特氏菌检测详解.pptVIP

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李斯特氏菌 特征 格氏李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 绵羊李斯特氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 默氏李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 β -溶血 - - + + - + - CAMP (Staphylococcus aureus) - - - + - + - CAMP (Rhodococcus equi) - - + - - - - 甘露醇 + - - - + - - α甲基-D-甘露糖苷 ND + - + ND - + L-鼠李糖 - d - + d - d 可溶性淀粉 + - - - + ND ND D-木糖 - - + - - + + 马尿酸盐水解 - + + + - ND ND 硝酸盐还原 - - - - + ND ND 小鼠致病力 - - + + - - - 当前第1页\共有25页\编于星期二\19点 样品的存放与制备 冷冻样品:应于2℃~5℃解冻,且不超过18小时;若不能及时检验,应置于-15℃保存。 非冷冻的易腐样品:尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于4℃冰箱保存,在24h之内检验。 无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mL FB1增菌液中,充分均质。 当前第2页\共有25页\编于星期二\19点 增菌培养 225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h,吸取1mL,加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二次增菌25h±1h。 当前第3页\共有25页\编于星期二\19点 VIDAS快速筛选(可选) FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。 当前第4页\共有25页\编于星期二\19点 分离培养 取增菌液一环,划线分离于选择性培养基OXA、PALCAM上,35℃±1℃培养24h~48h。 菌落形态:24h后菌落呈现黑色,直径为1mm,在其周围形成一个黑色环。培养48h,菌落仍成黑色,直径2mm~3mm,除在菌落周围有一环外,在菌落中心部位的深层也形成黑点。 挑取5个或更多的可疑菌落,接种于TSA-YE。 当前第5页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 蓝色菌落检验 用45°斜射光照射TSA-YE平板,菌落呈现蓝灰色到蓝色。 (设标准菌株对照) 当前第6页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状杆菌,可见轻微的旋转翻滚。 (设标准菌株对照) 注:压片法或悬滴法 暗光 当前第7页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应 注:陈旧培养物多转为阴性。 当前第8页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上,滴加1滴3%的过氧化氢溶液,李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。 当前第9页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 溶血试验 刺种7%羊血琼脂平板,并刺种阳性对照菌(单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌)和阴性对照菌(英诺克李斯特氏菌),30℃培养24h~48h。 单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环 西尔李斯特氏菌 窄小的β溶血环 绵羊李斯特氏菌 大的β溶血环 其他 不溶血 当前第10页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 动力试验 穿刺SIM半固体培养基,于室温(20℃~25℃)培养48h。 李斯特氏菌有动力,呈典型的伞状生长。 当前第11页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 硝酸盐还原试验 接种于硝酸盐肉汤,于35℃培养5d。 李斯特氏菌为阴性。 当前第12页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 MR-VP试验 接种于MR-VP肉汤中,于35℃培养48h。 李斯特氏菌为阳性反应。 当前第13页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 三糖铁试验 接种于TSI,35℃培养5d。 李斯特氏菌斜面和底层产酸,不产硫化氢。 当前第14页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 尿素酶试验 穿刺尿素琼脂斜面,于35℃培养5d。 李斯特氏菌尿素酶试验阴性。 当前第15页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 糖发酵试验 接种0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内,35℃培养24h~48h,阴性继续培养到第5天。 当前第16页\共有25页\编于星期二\19点 李斯特氏菌菌种鉴别特征 中文菌名 学名 蓝色菌

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