单增李斯特氏菌检测详解.pptVIP

李斯特氏菌 特征 格氏李斯特氏菌 英诺克李斯特氏菌 绵羊李斯特氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 默氏李斯特氏菌 西尔李斯特氏菌 威尔斯李斯特氏菌 β -溶血 － － ＋ ＋ － ＋ － CAMP (Staphylococcus aureus) － － － ＋ － ＋ － CAMP (Rhodococcus equi) － － ＋ － － － － 甘露醇 ＋ － － － ＋ － － α甲基-D－甘露糖苷 ND ＋ － ＋ ND － ＋ L-鼠李糖 － d － ＋ d － d 可溶性淀粉 ＋ － － － ＋ ND ND D-木糖 － － ＋ － － ＋ ＋ 马尿酸盐水解 － ＋ ＋ ＋ － ND ND 硝酸盐还原 － － － － ＋ ND ND 小鼠致病力 － － ＋ ＋ － － － 当前第1页\共有25页\编于星期二\19点 样品的存放与制备 冷冻样品：应于2℃～5℃解冻，且不超过18小时；若不能及时检验，应置于－15℃保存。 非冷冻的易腐样品：尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于4℃冰箱保存，在24h之内检验。 无菌取样品25g(mL)放入灭菌均质杯或均质袋中加225mL FB1增菌液中，充分均质。 当前第2页\共有25页\编于星期二\19点 增菌培养 225mL FB1 30℃±1℃培养25h±1h，吸取1mL，加入10mL FB2增菌液中30℃±1℃二次增菌25h±1h。 当前第3页\共有25页\编于星期二\19点 VIDAS快速筛选（可选） FB2增菌液进行VIDAS快速筛选。 筛选为阴性的结果可直接报告未检出。 筛选为阳性的结果继续分离培养和鉴定。 当前第4页\共有25页\编于星期二\19点 分离培养 取增菌液一环，划线分离于选择性培养基OXA、PALCAM上，35℃±1℃培养24h～48h。 菌落形态：24h后菌落呈现黑色，直径为1mm，在其周围形成一个黑色环。培养48h，菌落仍成黑色，直径2mm～3mm，除在菌落周围有一环外，在菌落中心部位的深层也形成黑点。 挑取5个或更多的可疑菌落，接种于TSA-YE。 当前第5页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 蓝色菌落检验 用45°斜射光照射TSA-YE平板，菌落呈现蓝灰色到蓝色。 （设标准菌株对照） 当前第6页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 典型运动镜检 李斯特氏菌为短棒状杆菌，可见轻微的旋转翻滚。 （设标准菌株对照） 注：压片法或悬滴法 暗光 当前第7页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 革兰氏染色 短杆状革兰氏阳性反应 注：陈旧培养物多转为阴性。 当前第8页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 过氧化氢酶试验 挑取TSA-YE平板上的菌落于洁净载玻片上，滴加1滴3％的过氧化氢溶液，李斯特氏菌呈过氧化氢酶阳性反应。 当前第9页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 溶血试验 刺种7％羊血琼脂平板，并刺种阳性对照菌（单核细胞增生李斯特氏菌和绵羊李斯特氏菌）和阴性对照菌（英诺克李斯特氏菌），30℃培养24h～48h。 单核细胞增生李斯特氏菌 窄小的β溶血环 西尔李斯特氏菌 窄小的β溶血环 绵羊李斯特氏菌 大的β溶血环 其他 不溶血 当前第10页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 动力试验 穿刺SIM半固体培养基，于室温（20℃～25℃）培养48h。 李斯特氏菌有动力，呈典型的伞状生长。 当前第11页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 硝酸盐还原试验 接种于硝酸盐肉汤，于35℃培养5d。 李斯特氏菌为阴性。 当前第12页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 MR－VP试验 接种于MR－VP肉汤中，于35℃培养48h。 李斯特氏菌为阳性反应。 当前第13页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 三糖铁试验 接种于TSI，35℃培养5d。 李斯特氏菌斜面和底层产酸，不产硫化氢。 当前第14页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 尿素酶试验 穿刺尿素琼脂斜面，于35℃培养5d。 李斯特氏菌尿素酶试验阴性。 当前第15页\共有25页\编于星期二\19点 鉴定 糖发酵试验 接种0.5%葡萄糖、麦芽糖、七叶苷、甘露醇、鼠李糖、木糖发酵管内，35℃培养24h～48h，阴性继续培养到第5天。 当前第16页\共有25页\编于星期二\19点 李斯特氏菌菌种鉴别特征 中文菌名 学名 蓝色菌