免疫荧光法―冰冻切片.docxVIP

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2023-09-13 发布于山东
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免疫荧光法实验——冰冻切片间接法【标本】正常肝、肝癌标本冰冻切片【抗体和试剂】（1）荧光标记抗体：兔抗人LAPTM-4B-N端（胞浆内）一抗；羊抗兔 IgG-TRITC二抗；小鼠抗人integrin6McAb；小鼠抗人EGFR多抗（小鼠抗人EGFR单抗）；羊抗鼠IgG-FITC二抗（工作浓度为1:30）； 2） 0.01mol/LpH 7.4PBS 3）2%BSA：用于配制一抗及关闭非特异性联合位点（可用正常羊血清关闭非特异性联合位点） 4）缓冲甘油封片：1份 0.1mol/LpH 8.0磷酸缓冲液与9份甘油混淆 0.2mol/LPB： Xml 0.2mol/LNa 2HPO 1/2 4+Yml 0.2mol/LNaH 2PO4pH 8.0X= 94.7ml;Y= 5.3ml 【染色步骤】 1．冰冻切片室温丙酮（冷丙酮）固定10min，PBS洗5min×3； 2．2％BSA37C关闭60min或4C留宿； 3．置切片于湿盒内，分别滴加一抗37C30min； 4．PBS洗5min×3； 5．分别滴加二抗37C30min； 6．PBS洗5min×3； 7．若染核；用1g/mlHoechst33342染色10min；PBS洗5min×3； 8．缓冲甘油封片； 9．荧光显微镜下察看或-20℃避光保留； 2/2