水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定的中期报告.docxVIP

水蕨中含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因的克隆及功能鉴定的中期报告 本研究旨在从水蕨中克隆出含铁型超氧化物岐化酶Fe-SOD基因，并对其进行功能鉴定。目前已完成的工作如下： 1.设计Fe-SOD基因特异引物 根据GenBank上已发表的其他物种中Fe-SOD基因的序列，在水蕨的全长cDNA序列基础上设计出两对特异性引物：Fe-SOD-F/Fe-SOD-R和Fe-SOD-F1/Fe-SOD-R1。 2.RT-PCR扩增Fe-SOD基因 利用上述引物对水蕨全长cDNA进行RT-PCR，获得了一条约700 bp的片段。测序结果表明，该片段与已发表的Fe-SOD基因序列高度相似。 3.构建重组质粒并转化大肠杆菌 将PCR产物克隆到pMD18-T载体上，测序验证后，将正确的重组质粒转化到大肠杆菌中。 4.表达、纯化和活性测定 经过一系列纯化步骤，获得了表达的Fe-SOD蛋白。通过西方印迹和活性鉴定实验，证明纯化的蛋白具有Fe-SOD的酶活性。 目前，我们已成功克隆出水蕨中的Fe-SOD基因，并初步证明其具有Fe-SOD的功能。接下来的工作将重点在详细表征该基因的生化特性、结构和生理功能等方面进行深入研究。