核酸合成 第1部分：合成寡核苷酸的生产和质量控制要求.pdfVIP

核酸合成 第 1 部分：合成寡核苷酸的生产和质量控制要求 1 范围 本文件规定了合成寡核苷酸（通常最多250个碱基）的生产和质量控制要求。 本文件还描述了合成寡核苷酸的一般质量指标以及质量评价指标的常用方法。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 有证标准物质 certified reference material CRM 附有由权威机构发布的文件，提供使用有效程序获得的具有不确定度和溯源性的一个或多个特性值 的标准物质。 [来源：ISO Guide 30:2015,2.1.2,修改-注释已删除。] 3.2 性能 performance 合成寡核苷酸具有满足合成特定目的用途（包括生物学测定法）的寡核苷酸的能力。 注1：合成的寡核苷酸在作为PCR引物的情况下，合成的寡核苷酸具有引物的性能。 注2：合成的寡核苷酸在作为探针以用于DNA微阵列、实时PCR或NGS的情况下，合成的寡核苷酸具有与靶核酸特异性 杂交的能力。 注3：通过评估寡核苷酸在其各自用途中的功能来确认其性能。 3.3 纯度 purity 合成寡核苷酸合成寡核苷酸的预期序列和/或长度与寡核苷酸总量之间的比率。 注：合成寡核苷酸的纯度是对应于合成寡核苷酸的预期序列和/或长度的吸收峰面积与寡核苷酸的总峰面积的比率。 通过高效液相色谱（HPLC）或毛细管电泳（CE）计算260 nm处的吸光度（OD 260）。纯度是根据HPLC或CE或质 谱仪的结果通过面积归一化法计算的。 3.4 标准物质 reference material RM 具有一种或多种足够均匀和稳定的特定特性的物质，其特性适用于测量过程中的预期用途。 [来源：ISO Guide 30:2015，2.1.1，修改-注释已删除。] 3.5 合成寡核苷酸 synthetic oligonucleotides 用化学方法合成的DNA （脱氧核糖核酸）或RNA （核糖核酸）。 1 注1：各种化合物（例如修饰的碱基、碱基类似物、末端标记试剂、荧光化合物等）均可以引入到合成的寡核苷酸 中。 注2：本文件中的合成寡核苷酸是单链的、线性的，长度从大约10个到250个核苷酸。 4 寡核苷酸的设计和选择 合成寡核苷酸的质量和一致性要求依据其预期用途有差异。例如，引物和探针在聚合酶链反应（PCR） 或微阵列或NGS中的质量要求不同。 通常，用户负责指定具体用途的寡核苷酸的质量要求。 用户可以从生产商提供的质量等级列表中选择符合预期用途的质量等级，例如“基因组等级”或“反 义等级”（参见5.2）。 健全的质量管理和检测以及对质量控制要求的共识，可以达成一致信息，以便： ——用户适当地选择符合预期用途的寡核苷酸； ——用户和生产商能够更好地沟通，并就定制寡核苷酸的要求达成一致。 5 一般质量管理要求 5.1 一般要求 合成寡核苷酸的生产者（以下称为“生产者”）应建立并实施一种程序，包括描述并保存记录以下 过程： a) 订单信息； b) 寡核苷酸的生产； c) 质量控制要求。 应制定订单接收过程中的质量方针和质量目标。用户的质量要求可能因其预期用途、实验方法的设 计以及影响重复性和再现性结果因素的差异而变化。生产商应根据订单信息明确质量方针、质量目标和 合成寡核苷酸的等级（如适用），根据质量等级表等方式监控是否按照相应的工艺进行生产 （示例见附 录A）。此外，应在生产过程中采取必要的措施，通过测量和分析所生产的合成寡核苷酸的质量来达到 预期的结果。 5.2 寡核苷酸分级 为了减少对质量要求的过度定制，可以考虑对寡核苷酸质量进行分级。生产商在记录寡核苷酸质量 等级时，应根据预期用途确定等级。应选择和确定符合每个等级的纯化方法，见7.3。 5.3 控制文件 生产商应制定一套程序，确保对程序化信息（包括本文件要求的记录）进行受控，并应确保防止任 何作废文件的非预期使用。文件信息包括记录保存在电子媒介中时，生产者应确保对电子媒介的受控。 5.4 质量管理体系 生产者应建立质量管理体系。