山羊c-Myc基因的原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体的制备的中期报告.docxVIP

山羊c-Myc基因的原核表达及多克隆抗体和单克隆抗体的制备的中期报告 在制备山羊c-Myc基因表达载体时，我们首先使用PCR扩增得到了山羊c-Myc基因的完整开放阅读框（ORF），并将其克隆到pET-28a表达载体中，得到了pET28a-c-Myc。接着，我们将该表达载体转化到大肠杆菌BL21 (DE3)中进行原核表达。经过SDS和Western Blot的检测，我们发现目的蛋白成功地表达并纯化出来了。我们用经过亲和纯化的蛋白免疫家兔，制备了多克隆抗体。 同时，我们还将c-Myc基因克隆到pGEX-4T-1载体中，利用GST融合蛋白技术制备了c-Myc-GST融合蛋白，并用该融合蛋白对BALB/c小鼠进行免疫。随后通过脾细胞的融合和筛选，得到了单克隆抗体。我们进行了Western Blot和免疫荧光染色实验，证明了该单克隆抗体的特异性和较高灵敏度。 下一步，我们将进一步对多克隆抗体和单克隆抗体进行纯化和鉴定。同时，我们将用这些抗体进行c-Myc蛋白的检测，并探究其在肿瘤细胞增殖和转移中的作用。