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小干扰RNA抑制HCV感染细胞中病毒复制的研究的中期报告
本研究旨在探究小干扰RNA(siRNA)抑制乙型肝炎病毒(HCV)感染细胞中病毒复制的机制。在前期实验中,我们成功构建了携带靶向HCV基因的siRNA载体,并验证了其在Huh7细胞系中的转染效果和靶向病毒基因的能力。
在本期实验中,我们首先通过荧光显微镜观察了siRNA是否能够有效靶向HCV感染的细胞,并发现靶向HCV基因的siRNA能够显著减少感染细胞中的病毒数量。接下来,我们通过Western blot分析,发现HCV感染细胞中的NS3蛋白和NS5B蛋白的表达量均受到了siRNA的抑制。实时定量PCR进一步证实了siRNA的抑制效果,HCV RNA的表达量也随之降低。
进一步的机制研究表明,siRNA可能通过抑制HCV蛋白的合成来影响病毒的复制。通过免疫共沉淀实验,我们发现NS5B蛋白与BET蛋白FUS的结合能力随着HCV感染而增强,而siRNA的靶向使该结合受到了抑制,从而影响了NS5B蛋白的翻译后修饰和定位。
综上,我们的结果显示,靶向HCV基因的siRNA能够抑制病毒的复制,并可能通过抑制HCV蛋白的合成影响病毒的复制机制。这一发现为病毒治疗和siRNA应用提供了新的思路和依据。
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