核酸的分离纯化和鉴定.pptVIP

第一页，共十八页，2022年，8月28日 核酸包括DNA、RNA，在细胞中都与蛋白质结合而存在。 分离纯化核酸总的原则 : 1、保证一级结构的完整性，完整的一级结构是研究核酸 结构和功能的基础； 减少化学、物理、生物因素对核酸的降解： 避免过酸、过碱对磷酸二酯键的破坏； 避免机械剪切力以及高温煮沸； 抑制DNase或RNase的活性； 2、排除蛋白质、脂类、糖类等分子的污染。 第二页，共十八页，2022年，8月28日 真核DNA提取的主要步骤 真核生物的一切有核细胞（包括培养细胞）都 可以用来制备基因组DNA。 温和裂解细胞，溶解DNA，使DNA与组蛋白分离； 采用化学或酶学方法去除蛋白质、RNA及其他大分子。 第三页，共十八页，2022年，8月28日 外周血白细胞DNA的提取（NaI法） 原理 利用双蒸水低渗溶胀红细胞及白细胞膜，释放出血红蛋白及细胞核，NaI破核膜并有效解离DNA-蛋白质复合物，使核酸处于易提取状态， 再以氯仿/异戊醇抽提（蛋白质变性沉淀并溶解脂类，异戊醇可减少抽提过程中的泡沫产生），离心后DNA存在于上层水相中，以37%异丙醇沉淀及洗涤DNA，即获得白细胞DNA。用此法提取的DNA可用于Southern 杂交、PCR的模板等。 第四页，共十八页，2022年，8月28日 【试剂】 1．6 m