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凝胶 DNA 回收试剂盒说明书 产品组成 凝胶DNA 回收试剂盒 5 次样品 50 次制备 250 次制备 Cat. No. 2001005 2001050 2001250 核酸纯化柱 5 个 50 个 50 个×5 2 ml 离心管 5 个 50 个 50 个×5 1.5 ml 离心管 5 个 50 个 50 个×5 Buffer G 3 ml 30 ml 150 ml Buffer WS 3 ml 30 ml 150 ml Buffer WG（浓缩液） 2.4 ml 24 ml 72 ml ×2 Buffer TE 0.5 ml 5 ml 25 ml 说明书 1 份 1 份 1 份 产品储存与有效期 产品如果储存于室温（15~25℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于 2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部： e-mail: , 电话： 400-0099-857。 产品介绍 本试剂盒采用了柱纯化的原理， 适合从多至 400mg 琼脂糖凝胶中回收 DNA （70bp-10kb），回收率为 70～85%。溶胶试剂为不含碘化钠的温和溶解液，确保回收的 DNA保持片断完整性和高生物学活性，回收的DNA 可直接用于连接、体外转录、PCR 扩增、测序、微注射等分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 无水乙醇 1.5ml 离心管、移液器及吸头 一次性手套、纸巾及防护用品 台式小量离心机（可配离心 1.5ml 离心管和 2ml 离心管的转子） 使用前准备 如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 根据试剂瓶标签上的指示在 Buffer WG 中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“ 乙醇已加”的标记。 将水浴锅的温度设置为 50°C。 可能需要使用 3 M 醋酸钠（pH 5.0）及异丙醇。 操作步骤 在紫外灯下将含有 DNA 片段的琼脂糖凝胶切下，转移到一个自备的 1.5 ml 离心管中。 尽量减少多余的凝胶体积，可缩短溶胶时间。 称量切下的凝胶重量，加入3 倍体积的 Buffer G（每 1mg 凝胶换算为 1μl 凝胶体积）。 比如 100mg 凝胶应加入 300 μl BufferG。 如果凝胶浓度大于 2%，应加入 6 倍体积的 BufferG。 将装有凝胶的离心管 50°C 水浴直至凝胶完全溶解（大约 5-10 分钟）。 溶胶的过程中每隔 2-3 分钟翻转一次离心管以帮助凝胶溶解，并观察凝胶是否彻底溶解。 BufferG 中所添加的染料可帮助观察凝胶是否彻底溶解，同时可指示 pH 值，溶胶时如果溶液呈紫红色， 则应加入 10 μ l 3 M 醋酸钠（pH 5.0）使溶液恢复至原来的颜色，否则将影响DNA 结合到纯化柱上。 加入 1 倍凝胶体积的异丙醇，混合均匀。 如果回收的 DNA 片段在 500bp~4kb 之间，可省略本步骤。 比如从 100 mg 凝胶中回收 DNA，应加入 100 μl 异丙醇。 如果从大于 2%的凝胶中回收 DNA，则应加入 2 倍凝胶体积的异丙醇。 将溶胶液转移到核酸纯化柱中（核酸纯化柱置于 2ml 离心管中），12000 rpm 离心 30 秒。 如果溶胶液体积大于 750 μl（相当于从 250 mg 凝胶中回收 DNA），应分两次离心过柱。 弃 2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到 2ml 离心管中，加入 500 μl Buffer WS, 盖上管盖，12000 rpm 离心 30 秒。 滤液无须彻底弃尽，如果要避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染，可将2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。 弃 2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到 2ml 离心管中，加入 700 μl Buffer WG, 盖上管盖，12000 rpm 离心 30 秒。重复步骤 7）一次。 确认在 Buffer WG 中已经加入无水乙醇。 两次洗涤 Buffer WG 洗涤能更有效地降低纯化柱上盐分的残留，请勿省略。 弃 2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到 2ml 离心管中，14000 rpm 离心 1 分钟。 如果离心机的离心速度达不到 14000 rpm，则用最高速离心 2 分钟。 请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的实验效果。 弃 2ml 离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的 1.5 ml 离心管（试剂盒提供） 中，在纯化柱的膜中央加入 25－30 μl Buffer TE，盖上管盖，室温静置 1 分钟， 12000 rpm 离心 30 秒洗脱 DNA。 也可用去离子水洗脱 DNA，但应确保所使用的去离子水的 pH 在 7.0-8.5，否则将影响 DNA 的洗脱效率。 弃纯化柱，洗脱的 DNA 可立