高二生物苏教版课件：基因工程及其技术（第3课时）.pptVIP

* * 第三章 基因工程 第一节 基因工程及其技术 限制酶 DNA解旋酶 区别 限制性核酸内切酶与DNA解旋酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 限制酶 DNA水解酶 区别 限制性内切酶与DNA水解酶的区别 切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键，形成片段的DNA. 切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸。 DNA聚合酶 DNA连接酶 区别1 区别2 相同点 1)只能将单个核苷酸连接到已有的核酸片段上，形成磷酸二酯键 形成磷酸二酯键 1)在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 2)以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键连接成一条互补的DNA链 2)将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，不需要模板 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 项目 种类 作用底物 作用部位 作用结果 DNA(水解)酶 DNA 分子 磷酸二酯键 形成脱氧核苷酸 限制酶 DNA 分子 磷酸二酯键 形成片段的DNA DNA 连接酶 DNA 分子片段 磷酸二酯键 连接 DNA 片段 DNA 聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 连接脱氧核苷酸 DNA 解旋酶 DNA 分子 碱基对间的氢键 形成单链 DNA 分子 （多选）有关基因工程的叙述中，错误的是 A、基因工程技术能定向地改造生物的遗传性状，培育生物新品种 B、重组DNA的形成在细胞内完成 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、质粒都可作为运载体 答案：BD 2和7能连接形成…ACGT… ????????????? …TGCA…； 4和8能连接形成…GAATTC… ???????????? …CTTAAG…； 3和6能连接形成…GCGC… ???????????? …CGCG…； 1和5能连接形成…CTGCAG… ???????????? …GACGTC…。 目前被较广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 (一）提取目的基因 目的基因：人们所需要转移或改造的基因，主要指编码蛋白质的基因。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 提取目的基因的方法 ⑴直接分离基因(从基因文库中获取）——鸟枪法 　　将供体生物的DNA用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 ⑵人工合成基因法 有两种方法：　　　 ①直接合成法：根据蛋白质的氨基酸顺序推算出信使RNA核苷酸顺序，再据此推算出基因DNA的脱氧核苷酸顺序。用游离脱氧核苷酸直接合成相应的基因。 某种生物的单链mRNA 单链互补DNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 反转录法：cDNA的合成流程图解 DNA合成仪 （3）利用PCR技术扩增目的基因 （聚合酶链式反应） ②逆（反）转录法：以信使RNA为模板，在逆转录酶的作用下将脱氧核苷酸合成合成DNA(基因)。 质粒 DNA分子 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 (二)目的基因与运载体结合 基因表达载体的组成： 复制原点+目的基因+启动子+终止子+标记基因 (三)将目的基因导入受体细胞 转化 —— 方法 将目的基因导入 植物细胞(体细胞） 将目的基因导入 动物细胞（受精卵） 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 ——显微注射法 ——感受态细胞（Cacl2处理） 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 受体细胞 稳定 表达 (四)目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功 检测— 鉴定—— ①检测转基因生物染色体的DNA 上是否插入了目的基因 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ③检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等 方法—— 方法—— 方法—— DNA分子杂交 分子杂交 抗原抗体杂交 从苏云金芽苞杆菌中提取抗虫基因 从土壤农杆菌中提取带有选择性标记的质粒 同一种限制酶处理 抗虫基因与质粒结合形成重组质粒 将重组质粒导入土壤农杆菌 筛选 将土壤农杆菌与棉花细胞混合培养 侵染 重组质粒将抗虫基因导入棉花细胞并整合到棉花的DNA上 植物组织培养 获得抗虫