胆红素氧化酶诱导产生、分离纯化及对染料降解的研究的中期报告.docx

胆红素氧化酶诱导产生、分离纯化及对染料降解的研究的中期报告 本研究旨在探索胆红素氧化酶的生产和应用。在前期试验中，以大肠杆菌BL21(DE3)为宿主，构建了胆红素氧化酶的表达载体pET-28a-S. marcescens hemY，经IPTG诱导表达后得到了预期大小的重组蛋白。接下来，我们进行了胆红素氧化酶的纯化和鉴定工作。 首先，将大肠杆菌BL21(DE3)/pET-28a-S. marcescens hemY在LB培养基中进行预培养，转接至含有50 μg/mL的kanamycin的TB培养基中进行过夜感菌。获得的细胞物质通过裂解液和超声处理后获得细胞裂解液。接下来，分别经过了对列管层析、Q、SP柱的纯化步骤，并使用1 M NaCl洗脱目标蛋白，得到了含有胆红素氧化酶的纯化物。 紫外吸收率扫描分析表明，纯化物中存在663 nm的吸收峰，说明胆红素氧化酶成功纯化。通过聚丙烯酰胺凝胶电泳，可以看到纯化后的胆红素氧化酶呈现出一个清晰的单一蛋白带迹象，大小为42000 Da，与预期大小相符。 接下来，我们对纯化后的胆红素氧化酶进行了染料降解实验。在此实验中，选择了甲基橙、格兰试剂和邻苯二酚作为目标染料。实验结果表明，胆红素氧化酶能够有效地降解这三种染料，且随着时间的增加，染料的降解率也逐渐增加。 综合以上结果，我们成功地构建了胆红素氧化酶的表达系统，并对其进行了纯化和鉴定；同时也证实了胆红素氧化酶对染料的降解效果。在下一步的研究中，我们将继续探索如何提高胆红素氧化酶的生产和应用效率，以及拓展其在其他领域的应用。