生物分析专栏核酸药物的药代动力学和生物分析 .pdf

生物分析专栏核酸药物的药代动力学和生物分析 核酸药物是指可用于治疗疾病的核酸本身或与之密切相关的化合 物，包括天然核苷酸和经化学修饰的核苷酸。虽然核酸药物的类型多 种多样，但它们都有一个共同的作用机制，通过 Watson-Crick 碱基互 补配对机制特异性识别内源性核酸序列，从而发挥作用 [1]。除基因治 疗以外，用于治疗的核酸还可通过抑制 DNA 或 RNA 的表达，从而抑 制与疾病相关的异常蛋白表达，且不影响其他蛋白的表达 [2]。与抗体 药物相比，核酸药物表现出超过抗体药物的功效和安全性，又因相对 较小的分子量而利于药企批量生产。这些特点，使核酸药物有望应用 于以前难以治疗的癌症和遗传性疾病，以及流感等病毒感染引起的疾 病。 图 1 核酸药物分子量一、核酸药物的分类 核酸药物包括 DNA 药物和 RNA 药物。 1.DNA 药物 DNA 药物包括反义寡核苷酸和 DNA 适配体[3]。 （1 ）反义寡核苷酸 （ASO ） 反义寡核苷酸是长度在 8-50 个碱基的单链短序列，通过 Watson- Crick 碱基互补配对与 目标 mRNA 结合，使 目标 mRNA 被内源性的核 糖核酸酶 H 降解或使 目标 mRNA 因空间位阻而发生功能阻滞[4-5]。 （2 ） DNA 适配体 适配体又被称为“化学抗体” ，是合成的长度在 56-120 个碱基的 DNA 或 RNA 单链序列。适配体的 目标序列为蛋白编码序列，通常可 作为诱饵 ，与目标序列的亲和力极高。DNA 适配体与反义寡核苷酸类 似 ，都是单链短序列，可通过空间结构识别来有效结合 目标序列 [6]。 适配体具有无药物毒性、无免疫原性的特征 ，与单克隆抗体产品相比 组织穿透能力更强 ，更易生产，体外修饰更简单 ，并且可以静脉或皮 下注射 ，是未来替代单克隆抗体的更具潜力和吸引力的产品[7]。 2. RNA 药物 RNA 类核酸药物包括 short interfering RNAs （siRNA)、micro RNA （miRNA ）、 RNA 适 配 体 、 核 糖 酶 以 及 Circular RNAs （circRNA ）等。RNA 在细胞内的作用普遍被认为是蛋白合成过程中 的遗传信息传递信使，直到 19 世纪 80 年代，RNA 的其他功能才逐渐 被揭开[3]。 （1 ） siRNA siRNA 是一个长 20 到 25 个核苷酸的双链 RNA。siRNA 序列与基 因编码序列互补配对，诱导相应信使 RNA 降解，从而阻碍 mRNA 向 蛋白质翻译，即为 RNA 干扰。RNA 干扰通路是 1998 年由 Fire 等人 在线虫研究过程中发现，RNA 干扰机制见图 2。RNA 干扰机制的功能 似乎是机体实现自我保护的手段，保护自身免受外来可移动的遗传信 息的侵袭，如诱导活跃期病毒引起 RNA 或双链 RNA 的降解[8]。由于 RNA 干扰可以通过体外实验诱导发生 ，siRNA 的治疗对于由基因异常 表达或基因突变引起的疾病，如癌症、病毒感染和遗传疾病等具有巨 大的应用潜力 [7] ，并且干扰过程发生在细胞质中，不需要穿透细胞核， 这使 siRNA 药物开发更具吸引力。 图 2 RNA 干扰机制(a, b) siRNA and miRNA pathway[9] （2 ） miRNA miRNA 于 1993 年发现，从蠕虫基因组信息到与人类疾病相关 ， 其功能逐渐被研究和发掘[10]。miRNA 是非编码基因组的重要组成部 分 ，由 15-22 个碱基组成。是转录后基因表达调控中关键的负调节因 子。miRNA 疗法又可分为两类 ，一类为 miRNA 拮抗剂 ，另一类为人 工合成 miRNA 类似物 ，其中后者又被称为 “miRNA 替代疗法”[3]。 研究表明 ，miRNA 的失调与人类多种疾病的发病机制相关 ，如糖尿病、 肥胖、阿尔茨海默氏症、帕金森氏症以及心血管和 自身免疫性疾病等 病变组织中都存在 miRNA 的过表达[11] ，这使得 miRNA 成为疾病研 究的靶点之一 [12-13]。miRNA 作为治疗药物的优势在于 ，它们能够 同时作用于多个分子 ，而不像传统的靶向单个基因，这使 miRNA 在调 节与正常和癌症细胞生物学相关的不同生物细胞过程中极为