重组新城疫病毒NDV-rAnhEGFP的构建及其抑制肿瘤效果的研究的中期报告.docxVIP

重组新城疫病毒NDV-rAnhEGFP的构建及其抑制肿瘤效果的研究的中期报告 本项目旨在通过构建重组病毒NDV-rAnhEGFP，研究其在抑制肿瘤方面的效果。 一、材料与方法： 1.1 细胞和病毒 本实验中使用的细胞为鸡腺癌细胞DF-1，病毒为新城疫病毒（NDV）La Sota株。 1.2 克隆表达质粒 本实验中使用的靶向肿瘤细胞的表达载体为pHAGE2-CMV-EGFP-puro，其表达的绿色荧光蛋白（GFP）具有强烈的荧光信号，方便检测。 1.3 重组病毒构建 首先在pHAGE2-CMV-EGFP-puro质粒中插入NDV的核衣壳蛋白（NP）基因，将其构建成质粒pHAGE2-CMV-EGFP-puro-NP。接着将pHAGE2-CMV-EGFP-puro和NDV-La Sota株进行共转染，利用NDV-La Sota株的复制和表达机制，通过重组技术构建出重组病毒NDV-rAnhEGFP。 1.4 细胞毒性和增殖实验 通过MTT法测定重组病毒对DF-1细胞的毒性和增殖抑制能力。同时，利用流式细胞术检测重组病毒感染DF-1细胞后的EGFP表达情况。 二、预期结果： 预期能够成功构建出重组病毒NDV-rAnhEGFP，并证明其对肿瘤细胞具有抑制作用。同时，能够检测到重组病毒感染DF-1细胞后的EGFP表达情况，为验证重组病毒的有效性提供可靠的依据。 三、目前进度： 已完成了重组病毒构建和细胞毒性及增殖实验。初步结果显示，重组病毒对DF-1细胞具有一定的毒性和增殖抑制能力，同时也能够表达EGFP。接下来将进行肿瘤实验验证其抑制作用。