农杆菌介导的水稻锌指蛋白基因ZFP36的遗传转化及耐逆性鉴定的中期报告.docxVIP

农杆菌介导的水稻锌指蛋白基因ZFP36的遗传转化及耐逆性鉴定的中期报告 本中期报告旨在介绍农杆菌介导的水稻锌指蛋白基因ZFP36的遗传转化及耐逆性鉴定的研究进展。 一、实验方法 1. 构建遗传转化载体 基于T-DNA插入技术，构建遗传转化载体。采用PCR扩增ZFP36基因，克隆到植物表达载体pCAMBIA1391中。随后将构建好的载体转化入大肠杆菌中，利用化学法将载体引入农杆菌LBA4404中。 2. 水稻愈伤组织的培养和遗传转化 将水稻愈伤组织接种于含有10mg/L潮霉素的不含植物激素的N6培养基中，进行预培养。随后，将转化好的农杆菌LBA4404和水稻愈伤组织进行共同培养。培养完成后，采用含有250mg/L卡那霉素的N6培养基，筛选表达ZFP36基因的愈伤组织。 3. 耐逆性鉴定 将表达ZFP36基因的愈伤组织移植至含有高浓度盐、低温和极端干旱等逆境条件下生长的培养基中，定期观察愈伤组织生长情况，测量愈伤组织的生物量和酶活性等指标，评估其耐逆性。 二、实验结果 通过PCR扩增和测序，确认成功构建了植物表达载体pCAMBIA1391-ZFP36。利用基因枪法将载体转化入水稻愈伤组织细胞中，经过筛选，共得到15个表达ZFP36基因的愈伤组织系。在下述逆境条件下，测量其生长状态、生物量和酶活性等指标，评估耐逆性。 1. 盐胁迫 将愈伤组织移植至含有400mM NaCl的培养基中，对其生长情况进行观察。结果显示，表达ZFP36基因的愈伤组织系比对照组具有更强的耐盐性，对高盐环境更为适应。 2. 低温胁迫 将愈伤组织移植至含有4℃的培养基中，对其生长情况进行观察。结果显示，表达ZFP36基因的愈伤组织系比对照组具有更强的耐低温性，对低温环境更为适应。 3. 干旱胁迫 将愈伤组织移植至含有PEG8000的培养基中，对其生长情况进行观察。结果显示，表达ZFP36基因的愈伤组织系比对照组具有更强的耐干旱性，对干旱环境更为适应。 三、实验结论 本研究成功构建了植物表达载体pCAMBIA1391-ZFP36，通过基因枪法将载体转化入水稻愈伤组织细胞中，共得到15个表达ZFP36基因的愈伤组织系。在盐胁迫、低温胁迫和干旱胁迫等逆境条件下，表达ZFP36基因的愈伤组织系表现出更强的耐逆性。这表明ZFP36基因在水稻耐逆性中起着重要作用，为探究水稻耐逆性的分子机制提供了有益的线索。