第八章克隆基因的表达详解演示文稿.pptVIP

蛋白质分泌到壁膜间隙时，酵母菌的内切蛋白酶识别这个切点信号，把重组蛋白正确切下来。 信号肽的切割： 前导肽 Lys-Arg 重组蛋白（水蛭素） 内切蛋白酶 当前第126页\共有184页\编于星期五\9点 6.其它酵母表达系统 （1）乙肝表面抗原在嗜甲醇酵母中表达 在大型发酵反应器中容易生长； 以甲醇作唯一的碳源和能源，成本低。 有甲醇时，表达的乙醇氧化酶高达胞内总蛋白的40%！ ①嗜甲烷酵母（Pichia pastoris）的特点 当前第127页\共有184页\编于星期五\9点 HBsAg: 乙肝表面抗原。可以作为疫苗。 Aox1：乙醇氧化酶基因1启动子（受甲醇激活调控）。 His4：组氨酸合成所需的组氨酸脱氢酶基因。 3’-aox1：整合到特定染色体的位点序列。 ②表达载体构建（整合型）： 诱导物：甲醇 产量： 9×106剂疫苗/240L发酵罐 当前第128页\共有184页\编于星期五\9点 整合到染色体中 当前第129页\共有184页\编于星期五\9点 3. pTYB系列的特点 单柱一步纯化蛋白。 无需蛋白酶作用即可将目的蛋白与融合蛋白 IPTG诱导的T7启动子 分离纯化出天然蛋白，不带有载体蛋白残基。 当前第94页\共有184页\编于星期五\9点 九、外源蛋白质表达后的正确修饰 分子内二硫键、分子间二硫键。二硫键异构酶催化。使蛋白质能够正确折叠。