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- 2023-09-25 发布于上海
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木聚糖酶xyn-E18和IBDV VP5蛋白的表达纯化及晶体生长的中期报告
木聚糖酶xyn-E18的表达纯化方案:
1. 购买并扩增含有xyn-E18基因的表达质粒。
2. 将表达质粒转化至大肠杆菌中进行表达。
3. 通过较低的温度和IPTG诱导蛋白表达。
4. 通过超声波破碎法裂解大肠杆菌细胞获得xyn-E18蛋白表达物。
5. 通过离心等方法去除杂质。
6. 使用配体层析、离子层析和凝胶过滤等技术进行xyn-E18蛋白的纯化。
IBDV VP5蛋白的表达纯化方案:
1. 合成含有VP5基因的DNA序列。
2. 将VP5 DNA序列克隆到表达质粒中。
3. 将VP5表达质粒转化至大肠杆菌中进行表达。
4. 通过高温和IPTG诱导VP5蛋白表达。
5. 通过超声波破碎法或其他方法裂解大肠杆菌获得VP5蛋白表达物。
6. 通过离心等方法去除杂质。
7. 使用亲和层析和离子交换层析等技术进行VP5蛋白的纯化。
晶体生长:
经过以上步骤,我们得到了纯化后的xyn-E18蛋白和VP5蛋白。接下来,我们将进行晶体生长实验:
1. 将纯化后的xyn-E18蛋白和VP5蛋白分别进行浓缩。
2. 首先进行筛选试验,寻找最佳晶体生长条件。
3. 接下来,进行大规模生长晶体。
4. 利用X射线衍射技术收集数据,并进行结构分析。
目前,我们已完成了xyn-E18蛋白和VP5蛋白的表达纯化,并正在进行晶体生长实验,收集数据并进行结构分析的工作。
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