转肽酶SrtA的表达纯化与结晶及其抑制剂的筛选的中期报告.docxVIP

转肽酶SrtA的表达纯化与结晶及其抑制剂的筛选的中期报告 中期报告 一、研究背景 转肽酶SrtA属于革兰氏阳性菌的重要酶类，参与了革兰氏阳性菌的细胞壁多肽聚合、膜蛋白的定向转运和固定等蛋白质的修饰等过程。因此，对于SrtA的研究不仅有助于深入了解革兰氏阳性菌的生物学特性，也对于开发抑制SrtA活性的药物具有潜在的意义。 二、实验方法 1. 转肽酶SrtA的表达和纯化 使用平台菌株Escherichia coli BL21 (DE3)以pET-48b(+)载体介导进行融合蛋白表达。通过IPTG诱导表达，收获菌体后，进行不同的离心、超声、柱层析等纯化步骤，以期获得纯度较高的SrtA蛋白。 2. SrtA的结晶 通过组合策略，比较了弛豫和马来酰亚胺的两种方法的结晶效果，并使用甲基丙烯酰胺和PEG 4000等溶剂对结晶进行优化。最终得到了高质量的SrtA晶体样品。 3. SrtA抑制剂的筛选 运用生物物理化学与生物等多个角度对已知的SrtA抑制剂进行筛选，并对新的潜在的抑制剂进行初步筛选测试。 三、预期结果和意义 1. 获得SrtA的高纯度样品。 2. 确认SrtA的晶体结构，以期为进一步研究提供基础。 3. 通过抑制剂筛选，为进一步研究SrtA的作用机制和药物研发提供参考。 四、报告进度和计划 1. 已完成SrtA的表达和纯化，目前正在进行分子量鉴定和蛋白结构分析。 2. 已完成SrtA的结晶实验，目前正在优化结晶条件，并进行数据收集和分析。 3. 已完成已知的SrtA抑制剂的筛选测试，目前正在进行新的抑制剂的筛选实验。 4. 接下来的计划是确定SrtA晶体结构，并对新的抑制剂进行深入的筛选和药物研发实验。预计完成整个实验过程的时间为1年。