粘红酵母乙酰辅酶A羧化酶基因的克隆及表达的中期报告.docxVIP

粘红酵母乙酰辅酶A羧化酶基因的克隆及表达的中期报告 本研究旨在对粘红酵母乙酰辅酶A羧化酶（Saccharomyces cerevisiae Acetyl-CoA carboxylase，ACC）基因进行克隆和表达分析，为深入研究该基因在粘红酵母中的功能和代谢途径提供基础数据。 从粘红酵母细胞中提取总RNA，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增出ACC基因的全长序列，并进行了测序验证。进一步分析发现，该序列完整的编码了一个含有2188个核苷酸的开放阅读框（ORF），并预测出该基因的氨基酸序列。氨基酸序列比对结果表明，粘红酵母ACC基因序列与其他酵母和真菌ACC基因序列高度保守，有效保证了ACC酶的功能性。 将该基因克隆到表达载体pET-28a(+)中，利用大肠杆菌BL21(DE3)菌株进行表达，在IPTG诱导下获得了一定量的表达产物。通过SDS分析，可以看到在13kDa的位置出现了明显的蛋白带。进行Western blotting验证，证实该蛋白具有免疫反应性，表明已成功表达ACC基因。 综上所述，本研究成功克隆并表达了粘红酵母ACC基因，为深入研究粘红酵母代谢途径提供了基础数据和实验条件。