拟南芥AtCBL9蛋白的原核表达纯化及晶体生长研究的中期报告.docxVIP

拟南芥AtCBL9蛋白的原核表达纯化及晶体生长研究的中期报告 一、研究背景 拟南芥（Arabidopsis thaliana）是常用的模式植物之一，拟南芥的基因组已经被测序，使得拟南芥成为了分子遗传学、细胞生物学等领域研究的重要模式生物。CBL（Calcineurin B-like protein）家族是一类重要的植物细胞钙调素信号转导蛋白家族，与植物细胞的各种生理过程密切相关。研究表明，拟南芥CBL9（AtCBL9）在植物的生长发育、响应逆境等生理过程中扮演着重要角色。由于目前对AtCBL9的结构与功能了解不够深入，因此开展其蛋白的原核表达纯化及晶体生长研究，将有助于进一步揭示CBL家族蛋白的结构与功能特征。 二、进展情况 1. 基因克隆 通过PCR扩增、酶切和连接等方法，已获得AtCBL9基因全长的克隆。 2. 原核表达 构建了原核表达质粒pET28a-AtCBL9，将其转化到大肠杆菌BL21（DE3）细胞中。通过试验优化，得到了AtCBL9蛋白的较好表达条件（30℃，0.5mM IPTG诱导，4小时）。 3. 蛋白纯化 将AtCBL9蛋白在胞外表达中包含体中的沉淀物进行了初步纯化。通过西方印迹检测，已证实沉淀物中的蛋白为AtCBL9蛋白，但纯化效率较低。 4. 晶体生长 对初步纯化的AtCBL9蛋白进行了晶体生长试验。目前已经得到了一些初步结晶，但晶体质量有待进一步提高。 三、下一步工作 1. 优化蛋白提取和纯化条件，提高纯化效率。 2. 进一步优化晶体生长条件，提高晶体质量。 3. 开展X射线衍射及数据处理、结构分析等工作，揭示AtCBL9的结构与功能特征。