HPLC法测定转化液中γ-氨基丁酸含量及转化液的预处理研究的中期报告.docxVIP

HPLC法测定转化液中γ-氨基丁酸含量及转化液的预处理研究的中期报告 本次报告主要介绍了使用高效液相色谱（HPLC）法测定转化液中γ-氨基丁酸含量及转化液的预处理研究的进展情况。 一、研究背景 γ-氨基丁酸是一种具有抑制神经兴奋性作用的神经递质，在医学、保健品、食品等领域有着广泛的应用。因此，对于γ-氨基丁酸的分离纯化及定量分析方法的研究非常重要。目前，报道了许多γ-氨基丁酸的分离纯化方法，如膜分离、萃取、透析等。而定量分析方法中，HPLC法是一种常用的分析方法。 二、研究内容 1. HPLC法测定转化液中γ-氨基丁酸含量 （1）建立合适的色谱柱：采用C18反相色谱柱，流动相为甲醇-水（70：30），检测波长为338 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25℃，保证了 γ-氨基丁酸的良好分离。 （2）建立合适的标准曲线：采用同样的条件测得不同浓度（1.25-80 μg/mL）的γ-氨基丁酸标准溶液的峰面积，建立线性拟合方程 Y=3.2155X+4.2781，相关系数为0.9994。 （3）测定转化液中γ-氨基丁酸的含量：采用上述测定条件，样品经过蛋白沉淀、离心等预处理步骤后，测得γ-氨基丁酸的含量为23.45 mg/mL。 2. 转化液的预处理研究 以前处理步骤，如蛋白沉淀、离心、滤过等对测定结果有较大的影响，因此，对这些步骤的优化非常重要。在本研究中，考虑采用氯仿去除样品中的杂质，通过调节pH值提高γ-氨基丁酸的萃取率等预处理步骤进行优化研究。经过试验，选择用3%的氯仿去除蛋白质效果较好，同时在pH=2条件下提取γ-氨基丁酸的萃取率也较高。最终得出的样品处理方案为：转化液经过氯仿去除蛋白质，调节pH值为2，使用C18固定相进行HPLC分析。 三、进展情况 目前已成功建立了HPLC法分析γ-氨基丁酸含量的方法，并优化了样品的前处理步骤，其中蛋白质去除、酸碱度调节、萃取比重等因素对γ-氨基丁酸的含量测定结果有着重要的影响。下一步将对方法的准确性和重复性进行测试，验证方法的稳定性，并进行可行性分析和应用研究。