生物发酵床垫料的细菌学调查及主要病原菌分子检测方法建立的中期报告.docxVIP

生物发酵床垫料的细菌学调查及主要病原菌分子检测方法建立的中期报告 一、研究背景 生物发酵床垫料是一种利用微生物群体进行发酵处理的特种地基材料，具有优良的肥料效应，能提高土壤的有机质含量，改善土壤物理性质，促进植物的生长发育。然而，床垫料的微生物群体中可能存在多种致病菌，例如沙门氏菌、大肠杆菌等，对环境和人体健康都会造成一定的威胁。因此，对生物发酵床垫料中微生物群体进行研究，建立其主要病原菌分子检测方法具有重要的意义。 二、研究方法 1. 床垫料微生物群体分离与鉴定 采用生物发酵床垫料的常规加工工艺，获得床垫料样品。将样品随机挑选20份，每份取1 g作为分离与鉴定的样品。样品加入PBS缓冲液，经摇晃委静蒸发法制备出稀释液系列，每次取10 μL分别使用TSA、NA、PDA营养平板分别悬液培养，培养时间为24 h，然后选择20种不同形态的菌落，进行生物学特性鉴定和16S rRNA序列分析。 2. 主要病原菌分子检测方法的建立 根据文献报道，选取多PCR技术为基础，建立了沙门氏菌、大肠杆菌等主要病原菌的分子检测方法。采用DNA提取试剂盒提取样品中微生物的总DNA，进行PCR扩增，PCR反应体系为50 μL，反应程序为：预变性（95℃，5 min）、变性（95℃，30 s）、退火（55℃，45 s/62℃ 45 s/68℃ 45 s）、延伸（72℃，10 min）、末端延伸（72℃，10 min），反应产物进行洗涤、测序，分析序列，并与GenBank数据库中的16S rRNA序列进行比对。 三、研究结果 1. 床垫料微生物群体分离与鉴定 对20份床垫料样品中的微生物进行分离与鉴定，共鉴定出5个不同种类的菌群，包括青霉菌、链霉菌、酵母菌、芽孢杆菌和拟杆菌。其中青霉菌是菌群数量最多的一类，占据了总菌群数的60%以上。 2. 主要病原菌分子检测方法的建立 通过PCR扩增并测序，建立了沙门氏菌、大肠杆菌的分子检测方法。对20份床垫料样品进行检测，结果显示，沙门氏菌和大肠杆菌的检出率分别为45%和30%，且沙门氏菌菌载量明显高于大肠杆菌。 四、研究结论与展望 本研究初步调查了生物发酵床垫料中微生物的种类组成，并建立了沙门氏菌、大肠杆菌等主要病原菌的分子检测方法。未来，需要深入研究床垫料中微生物群体的变化规律及其对环境及人类健康的影响，并进一步完善其检测方法，为其安全应用提供科学依据。