DB52T 953-2014 贵州辣椒品种SSR 标记鉴定技术规程.docxVIP

ICS?65.020.01 B?21 DB52 贵 州 省 地 方 标 准 DB?52/T?953—2014 贵州辣椒品种?SSR?标记鉴定技术规程 2014?-?10?-?30?发布 2014?-?11?-?30?实施 贵州省质量技术监督局 发?布 贵?州?省?农?业?委?员?会 发?布 DB52/T?953—2014 目 次 前言?................................................................................? II 1??范围?..............................................................................? 1 2??规范性引用文件?....................................................................? 1 3??术语和定义?........................................................................? 1 4??试剂?..............................................................................? 1 5??辣椒品种鉴定的?SSR?标记（见附录?A）?.................................................? 2 6??分析步骤?..........................................................................? 2 7??结果判定?..........................................................................? 3 附录?A（资料性附录）??辣椒品种鉴定?SSR?标记的?PCR?引物?..................................? 5 I DB52/T?953—2014 前 言 本标准按照GB/T?1.1-2009《标准化工作导则?第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。 请注意：本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由贵州省农业委员会提出并归口。 本标准起草单位：贵州省辣椒研究所、贵州省标准化院、贵州省旱粮研究所。 本标准主要起草人：何建文、付文婷、朱云乐、杨文鹏。 本标准由贵州省辣椒研究所负责解释。 II DB52/T?953—2014 贵州辣椒品种?SSR?标记鉴定技术规程 1??范围 本规程规定了辣椒品种SSR标记鉴定方法。 本标准适用于贵州辣椒品种及种质资源鉴定。 2??规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T?6682 分析实验室用水规格和试验方法 3??术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 简单重复序列(Simple?Sequence?Repeat，SSR) 微卫星DNA，其串联重复的核心序列为1?bp-6?bp，其中最常见是双核苷酸重复，即(CA)?n和(TG)?n 每个微卫星DNA的核心序列结构相同，重复单位数目10-60个，其高度多态性主要来源于串联数目的不同。 4??试剂 以下所用试剂，除特别注明外，均为分析纯试剂，水符合国家GB/T?6682中规定的一级水标准。 4.1??1M?三羟甲基氨基甲烷-盐酸??Tris-HCl 称量121.1?gTris置于1?L烧杯中，加入约800?mL的去离子水，充分搅拌溶解，用浓盐酸调pH值至 8.0，加ddH2O定容至1?L。 4.2??0.5M?乙二胺四乙酸二钠 EDTA 称取186.1?g?EDTA置于1?L烧杯中，加入约800?mL的去离子水，充分搅拌。?用NaOH调节pH值至8.0， 加ddH2O定容至1?L。 4.3??5×TBE?缓冲液 称取54?g?Tris-base、27.5?g?硼酸（H3BO3）、3.72?g??EDTA?(乙二胺四乙酸二钠)?加ddH2O定容至 1?L。 4.4??CTAB?提取液 1 DB52/T?953—2014 分别量取10?ml?1?mol/L?Tris-HCL、30?ml?0.5?mol/L?EDTA、42?ml?5?mol/L?NaCl、PVP?2?g、CTAB 2?g，加水溶解后定容至100?ml，使用前加入1?ml巯基乙醇。 4.5??6%