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深低温冻存复苏的外周血干细胞中ROS水平与归巢粘附分子表达之间关系的研究的中期报告 中期报告 一、研究背景 外周血干细胞（Peripheral Blood Stem Cells，PBSCs）是由骨髓移植广泛使用的一种来源，它是由一种富含造血干细胞的细胞集合体，可以通过采集外周血来获得。PBSCs的优势在于患者采集外周血样品的坚实安全性相对较高，非常方便。然而，外周血干细胞的贮存问题一直是一个关键的瓶颈，其贮存温度的选择成为影响外周血干细胞运用的一个重要因素。 随着冷冻技术的发展，深低温冻存即成为了一种普遍使用的方法。深低温冻存技术有着很多优点，例如对细胞的应力和应激有缓冲作用，可以保持细胞的完整性和活力。但同时，在深低温冻存过程中，细胞的生理代谢活动会发生修动，包括线粒体功能受损，细胞膜完整性变化，累积的ROS等，这些都会影响细胞的生存和功能恢复。因此，考虑到深低温冻存后外周血干细胞的功能休假，很有必要通过研究深度冻存对外周血干细胞内ROS水平和归巢粘附分子表达的影响来更好地了解这一问题。 二、研究目的 本研究的主要目的是探究深低温冻存对外周血干细胞中ROS水平和归巢粘附分子表达的影响，为深低温冻存后的细胞恢复提供一定的理论基础和临床指导。 三、研究方法 1. 细胞来源：使用采集自健康志愿者的外周血作为研究样本。 2. 细胞处理：将PBSCs分割成深低温组和对照组。对照组PBSCs为新鲜的，未经过冷冻的样本。深低温组采用深低温冻存技术，将PBSCs冷冻至-196°C并保留在液氮中。细胞被回复后，我们将使用细菌素水解法将冻结药物去除。之后，我们将比较深低温组PBSCs的ROS水平和归巢粘附分子表达情况，并与对照组PBSCs进行比较。 3. 酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）：分别在深低温组和对照组PBSCs中检测ROS水平和归巢粘附分子（VCAM-1、ICAM-1和E-cadherin）的表达水平。 四、研究意义 本研究将对深低温冻存后外周血干细胞的功能恢复进行探究，清晰地展示它对ROS水平和归巢粘附分子表达的影响。这将有助于提高深低温冻存技术的应用效应，为细胞贮存和治疗提供一个更完美的选择，并支持外周血干细胞临床应用的最佳实践。