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NCI-N87 人胃癌细胞传代、复苏 NCI-N87 人胃癌细胞 Human Gastric Cancer Cells ,NCIN87 货号：YJ-h164（STR鉴定） 价格： 1500.0 规格： 1*10?6 细胞介绍 NCI-N87细胞表达表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且没有左旋多巴胺脱羧酶(DDC)活性。它们的血管活性的肠肽(VIP)受体活性极低并缺乏胃泌激素受体。 它们表达蕈毒碱胆碱受体。没有证据表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受体基因的重组。这个细胞株表达的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平与其它细胞株相当。以下基因不表达: N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌激素释放肽。据报道NCI-N87 细胞的植板率为4.3%。 细胞特性 1）?来源：胃癌，肝转移 2）?形态：上皮细胞样，贴壁生长 3）?含量：1x10^6??细胞数 4）?规格：T25瓶或者1mL冻存管包装 5)??用途：仅供科研使用。 运输和保存 干冰运输及复苏好存活细胞 （1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。 （2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。 细胞接收后的处理 1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。 2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。 3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。 4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。??收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。????????? 一．培养基及培养冻存条件准备： 1) 准备1640 基础培养基 ? ? ? ? ? ? ? ?? ? ? ?? (YJ-0002) ?????????????????????????? 87 % ???? 优质胎牛血清 ??????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 10 % ???? P/S青霉素-链霉素 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 1% ???? GlutaMAX-1谷氨酰胺 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? ( YJ-0900 ) ??????????????????????? 1% ????? Sodium Pyruvate丙酮酸钠 ? ? ? ? ? ? ? ? ( YJ-01100 ) ???????????????????? 1% 注意事项：该细胞贴壁较慢，且生长缓慢，建议复苏、传代后让细胞贴壁48h后再进行后续实验操作。细胞最初将附着形成小岛状，然后在这些密集的斑块中增殖，因此很难正确估计汇合度。避免细胞过密生长，及时更换新鲜培养基，以免培养基的pH受到不利影响。该细胞培养时，在培养基中会有一些漂浮细胞和碎片，并且在该细胞中可能会观察到较大的“囊泡”和颗粒状外观，是正常现象。 2）?培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。 3）?冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。 二．细胞处理： 1）?冻存细胞的复苏： 将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。 2）?细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。 对于贴壁细胞传代可以参考以下方法： 1.?弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗