拟南芥细胞质mRNA降解途径抑制转录后基因沉默的机理研究的中期报告.docxVIP

拟南芥细胞质mRNA降解途径抑制转录后基因沉默的机理研究的中期报告 本研究旨在探究拟南芥细胞质mRNA降解途径的抑制作用对转录后基因沉默的机理。具体而言，中期研究主要包括以下几个方面的工作。 一、实验设计与材料处理 为了观察拟南芥细胞质mRNA降解途径的抑制作用对转录后基因沉默的影响，我们设计了两组实验。一组是对野生型（WT）拟南芥植株进行处理，另一组是对含SUP45转基因的拟南芥植株进行处理。其中，SUP45是拟南芥中主导细胞质mRNA降解的脱氧核糖核酸酶。 在实验前，我们先将拟南芥植株生长在完全恒温恒湿、日照时间为12h/12h的温室中，保证它们的生长状况相对一致。接着收获这两类植株的18天幼苗，分别切取幼嫩嫩叶片进行处理。 其中，野生型拟南芥叶片分成两组，一组正常处理（对照组），一组使用两种不同的抑制剂（cycloheximide和cycloheximide加3-甲基腺嘌呤）共同处理（实验组）。含SUP45转基因的拟南芥叶片同样分为对照组和实验组，实验组除了加入两种抑制剂外，还要加入SUP45抗体。接着进行代谢实验和转录本分析。 二、代谢实验 在实验组和对照组中分别加入荧光素和伏马氏染液，观察各组叶片的荧光强度和伏马氏染色情况。通过这两项指标的对比，我们可以判断细胞质mRNA降解途径的是否被抑制，从而得到其对转录后基因沉默的影响。 三、转录本分析 使用qRT-PCR和Nort