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大肠杆菌基因敲除详细介绍 展开全文 我们知道在原核表达系统中，大肠杆菌是最常见的表达载体，而根据自身试验设计的差异，会选择不同的大肠杆菌使用，如表达蛋白一般选用E.coliBL21，分子克隆实验一般用DH5a等菌株，并且通过调研我们可以发现，之所以不同实验选用不同的菌株，其原因是这些专用的菌株在其野生型的基础上都进行了相应的基因改造。如BL21为了更好的表达分泌各种蛋白，敲除了一些位于膜结构上的蛋白酶；DH5a或TranslTl菌株为了更好的进行分子克隆实验，敲除了一种关键的核酸内切酶，得以保证外源基因能够稳定的存在于受体细胞内而我们在实验过程中还有很多根据自身需求敲除的基因，那么我们该如何设计并进行实验呢？下面我们简要说一下大肠杆菌基因敲除前需要做的一些思考。 第一，不要默认敲除是对目的基因序列完全去除（从atg到taa）。因为有时候会存在上下游基因的编码序列叠加的情况导致目的基因若完全去除会影响下游基因的转录与翻译，对表型造成影响。所以这种情况下，务必要保留目的基因末端的下游基因转录起始区域或核糖体结合区域。Inbacteria,genesareoftenarrangedinoperonsthataretranscribedasaunitandinwhichneighboringgenesfrequentlyoverlapafewtoseveralnucleotides.Ins